無縫克隆試劑盒

來源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發表時間：2012-08-22 10:51:00【大中小】

傳統的PCR產物克隆方法主要有兩種：一種是PCR引物設計時引入載體上的酶切位點，PCR產物經雙酶切后定向克隆到目的載體上；另一種是TA載體連接。這兩種方法費時費力，過程繁冗。

無縫克隆和組裝技術是一種新的、快速、簡潔的克隆方法，旨在克服上述缺陷，它可以在質粒的位點進行一個或多個目標DNA的片斷的插入，而不需要限制性內切酶和連接酶。突破傳統的雙酶切再加上連接，只需要一步重組法，即可得到高效率克隆的重組載體。上海西寶生物提供無縫克隆試劑盒，提高您的工作效率，讓您的工作變得輕松。

技術原理：

基因克隆的引物設計及目的DNA片段的擴增，與常規PCR法是相同的。差異在于載體末端和引物末端應具有15-20個同源堿基，由此得到的PCR產物兩端便分別帶上了15-20個與載體序列同源性的堿基。

技術特點：

1、位點選擇靈活：載體任意位置基因克隆；
2、快速簡便：大約30分鐘完成載體構建；
3、精確：不需要增加額外的程序；
4、克隆效率高，陽性克隆高達90%以上；
5、一次進行多片段目的基因的重組

引物設計方法：

無縫克隆操作過程：

1. 采用酶切或PCR擴增方法將就體線性化。
2. 使用設計好的引物進行目的DNA片段的PCR擴增（引物設計見說明書）。
3. 將目的DNA片段和線性化載體以摩爾比2.1加到試管中進行重組反應：
a. 反應液 15μl
b. 線性化載體 x μl
c. PCR片斷 x μl
d. H2O x μl
-------------------------
總體積 20 μl
4. 混勻后在50℃孵育30分鐘，然后轉移到冰上。 5. 使用5μl反應液轉化到感應態細菌中。
詳細操作步驟參見具體說明書。

應用：

1、片斷克隆，片斷組裝，突變構建；
2、基因表達，成膜，小RNA等功能研究；
3、蛋白質突變研究；
4、應用合成生物學；
5、代謝工程，菌株改造。

訂購信息：

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