節約蛋白類藥物新藥開發費用的糖基化產品

來源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發表時間：2015-04-27 13:12:00【大中小】

什么是糖基化

蛋白質糖基化是指在糖基轉移酶作用下將糖轉移至蛋白質，和蛋白質上的氨基酸殘基形成糖苷鍵的過程。糖基化是對蛋白的重要的修飾作用，具有調節蛋白質功能的作用。

N-糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可以和那一種糖基轉移酶結合，發生特定的糖基化修飾。

許多糖蛋白同時具有N-糖鏈和O-糖鏈。O-糖基化在高爾基體中進行，通常的一個連接上去的糖單元是N-乙酰半乳糖，連接的部位為Ser、Thr和Hyp的OH基團，然后逐次將糖基轉移到上去形成寡糖鏈，糖的供體同樣為核苷糖，如UDP-半乳糖。糖基化的結果使不同的蛋白質打上不同的標記，改變多肽的構象和增加蛋白質的穩定性。

為什么使用糖基化

由于嬰兒潮和老年人口日益增多，醫療保健的支出也水漲船高。生物類藥物一方面方興未艾，另一方面昂貴異常，普通病人難以承擔。

生物制藥為什么如此昂貴？

1、前期開發費用高，用于一個生物制藥新藥研發費用超過10億美金；
2、耗時長，有時甚至長達8年；
3、失敗率高

如何降低費用？

降低費用的方向是提高研發效率。研發效率體現在快速正確選擇或者快速試錯及時放棄失敗的方案。比較聰明的方法：富集藥物 - 通過糖基化方法增加藥物的濃度。

為什么選擇糖基化

在細胞株開發的時候優化藥物糖基化的優點：
可以大大提高安全性和有效性
可以極大地降低成本
增強生物仿制藥行業的管理和商業化壓力（糖基化的主要特性要與所開發的藥物相匹配）

通過糖基化進行生物藥物修飾的優勢：

1、顯著增強藥物復雜性和非均勻性
2、影響藥物活性。

不同藥物按反應活性分為三種糖型：

低活性糖主導的藥物
-效力較弱,可變性較差；

中活性糖主導的藥物
-效力較強,可變性較好；

高活性糖主導的藥物
-效力強,穩定一致；

目前市場上一些生物藥是以低活性糖占主導。

如何進行糖基化

如何通過糖型改變提高藥物？

Ludger生物科學公司是一家專注于測量與控制生物醫藥糖基化的公司，技術適用于在FDA的質量控制和EMEA批準的全球生物制藥企業，支持IND申報。Ludger的客戶包括世界各地領先的制藥公司和生物技術公司。Ludger藥品生產涵蓋了全面的與ICH兼容的生物醫藥糖基化分析試劑和檢測試劑盒。產品包括多糖釋放、標記和純化、標記聚糖、多糖HPLC柱,內糖苷酶和糖蛋白標準.同時Ludger將繼續開發新的產品,以確保為您提供更高品質產品。做為Ludger授權代理商，西寶生物竭誠為您服務。歡迎來電400-021-8158垂詢產品詳情或索取產品說明書。

糖基化檢測過程

Ludger的糖基化系列產品包括多糖釋放、分離不同類型糖、相對分子質量測定及糖鏈測序等步驟。

第一步：多糖釋放

為分析糖蛋白類型中糖聚合物的結構必須被首先分離糖和蛋白質, 這需要化學方法和酶方法。

1、化學法釋放多糖

在化學方法中, 可以通過使用肼解迅速分開O-或N-糖,或控制條件僅分離O-糖。

相關產品：

商品型號	英文品名	中文品名	包裝	說明
LL-HYDRAZ-A2	Hydrazinolysis Kit	N-聚糖和O-聚糖釋放試劑盒	2 Reaction Sets	用于從糖蛋白生物藥中N-多糖和O-多糖釋放，進行下游分析。
LL-ORELA-A2	Orela Kit	O-聚糖釋放試劑盒	2 Reaction Sets	用于從糖蛋白治療中釋放O-連接的聚糖

2、酶法釋放多糖

在酶方法中, 用肽N-糖苷酶F(PNGase F)分離N-連接的糖是可能的而且有用的?？墒? 能與O-連接的糖廣泛反應的酶還未被發現。

相關產品：

商品型號	英文品名	中文品名	包裝	說明
E-PNG01	PNGase F (Peptide N Glycosidase F)	糖基肽酶（肽N糖苷酶F）	0.3 Unit/60μl	用于從糖蛋白中酶解多糖
E-rPNG01	Recombinant PNGase F	重組糖基肽酶	0.3 Unit/60μl	用于從糖蛋白中酶解多糖
E-G001	O-Glycosidase	O-糖苷酶	5 mUnit/60μl	用于從糖蛋白中酶解多糖
E-EF01	Endoglycosidase F1	內切糖苷酶F1	1 Unit/60μl	用于從肽和蛋白質中切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖
E-EF02	Endoglycosidase F2	內切糖苷酶F2	0.3 Unit/60μl	用于從糖蛋白中切割N-連接（天冬酰胺連接）的雙十元寡糖
E-EF03	Endoglycosidase F3	內切糖苷酶F3	0.33 Unit/60μl	用于從肽和蛋白質中選擇性釋放三元和α（1-6）巖藻糖基雙十元N-聚糖
E-EH02	Endoglycosidase H	內切糖苷酶H	0.3 Unit/60μl	用于裂解天冬氨酸連接雜交或高甘露糖低聚糖
E-XBG01	Endo-β-Galactosidase	Endo-β-半乳糖苷酶	0.9 Unit/60μl	用于切割內部的β（1-4）半乳糖鍵
KE-DG01	Enzymatic CarboRelease Kit	酶的糖釋放試劑盒	20 µL of each enzyme	用于從糖蛋白中酶解多糖
KE-DGMX	Enzymatic DeGlycoMx Kit	酶的糖釋放試劑盒	20 µL premix	用于從糖蛋白中酶解多糖

相關鏈接：糖蛋白結構分析用多糖釋放試劑盒和酶

第二步：多糖的標記

因為糖自身沒有發色基團,為了在分離純化和結構鑒定過程中能夠更有效地檢測到糖鏈,往往要對其進行標記或衍生化,這對于微量糖鏈的分離分析是十分必要的。凡是具有半羧醛羥基的糖鏈都可以通過還原胺化反應來實現紫外及熒光衍生化。常用的紫外和熒光衍生化試劑有對氨基苯甲酸乙酯(ABEE)、乙酰氨基吖叮酮(AA2Ac)、氨基奈、3,62三磺酸(ANTS) 、2-氨基吡啶(2AP) 和2-氨基聯苯胺(2AB) 等。其中2-AP ,2-AB適用范圍較廣, 應用較多,標記試劑盒已經商品化,而且其衍生化糖鏈的標準糖譜已經初步建立。

相關產品：

商品型號	英文品名	中文品名	包裝
LT-KAB-A2	2-AB Glycan Labeling Kit	2-AB 多糖標記試劑盒	2 Reaction Sets
LT-KAB-VP24	2-AB Glycan Labelling Kit (2PB Reductant)	2-AB多糖標記試劑盒,2PB還原劑	2 Reaction Sets
LT-KAB-VP96	2-AB Glycan Labelling Kit (2PB Reductant)	2-AB多糖標記試劑盒,2PB還原劑	2 Reaction Sets
LT-KAA-A2	2-AA Glycan Labeling Kit	2-AA 多糖標記試劑盒	2 Reaction Sets
LT-KAA-VP24	2-AA Glycan Labelling Kit (2PB Reductant)	2-AA多糖標記試劑盒,2PB還原劑	2 Reaction Sets

相關鏈接：糖蛋白結構分析用多糖標記試劑盒

第三步：多糖的分離純化

分離純化是糖鏈結構研究過程中至關重要的一個環節,只有在各糖鏈組分被鑒定為單一純品時,對其進行結構分析才更準確和有意義。

相關產品：糖蛋白結構分析用多糖純化柱

商品型號	英文品名	中文品名	包裝	說明
LC-S-A6	S Cartridges	S 多糖純化柱	6 cartridges	用于從混合物中分離多糖成分
LC-T1-A6	T1 Cartridges	T1 多糖純化柱	6 cartridges	用于從混合物中分離多糖成分
LC-EB10-A6	EB10 Cartridges	EB10 多糖純化柱	6 cartridges	用于從混合物中分離多糖成分，含有無空EI matrix，很容易去除鹽和去垢劑成分
LC-EC50-24	EC50 Cartridges	EC50多糖純化柱	24 cartridges	用于從混合物中分離多糖成分

相關鏈接：糖蛋白結構分析用多糖純化柱

第四步：多糖分析

多糖分析通常采用HPLC法、UPLC法或者MALDIMS分析。

相關產品：

商品型號	英文品名	中文品名	包裝
LS-R-BPTX10	LudgerSep R BPT Solvent	BPT緩沖溶液	50ml
LS-N-BUFFX40	LudgerSep Ammonium Formate Buffer, pH 4.4	甲酸銨緩沖溶液,pH 4.4	50ml
LS-N2-2.0x150	LudgerSep N2 HPLC Column	N2 HPLC 色譜柱	2.0 x150 mm, 5 um
LS-C3-7.5x75	LudgerSep C3 HPLC Column	C3 陰離子色譜交換柱	7.5 x75 mm
CAA-NGA2F-01	NGA2F Glycan, 2-AA Labeled	NGA2F多糖標準品, 2-AA 標記	100 pmol
CAA-FA2G1-01	G1F Glycan, 2-AA Labeled	G1F多糖標準品, 2-AA標記	100 pmol
CAA-NA2F-01	NA2F Glycan, 2-AA Labeled	NA2F多糖標準品, 2-AA標記	100 pmol
CAA-MAN5-01	Man-5 Glycan, 2-AA Labeled	Man-5 多糖標準品, 2-AA 標記	100 pmol
CAA-A1F-01	A1F Glycan, 2-AA Labeled	A1F多糖標準品, 2-AA 標記	100 pmol
CAA-A1-01	A1 Glycan, 2-AA Labeled	A1 多糖標準品, 2-AA標記	100 pmol
CAA-NGA2-01	NGA2 Glycan, 2-AA Labeled	NGA2 多糖標準品, 2-AA 標記	100 pmol
CAA-A2G1-01	A2G1 Glycan, 2AA Labeled	A2G1 多糖標準品, 2AA 標記	100 pmol
CLIBN-IGG-01	IgG N glycan library	IgG N-多糖文庫	25 μg
CAB-IGG-01	IgG N glycan library, 2AB-labelled	IgG N-多糖文庫，2AB標記	200 pmol