Fluorospark(R) 激酶/ADP 多重檢測試劑盒（291-77401）

來源：作者：人氣：-發表時間：2020-09-02 15:50:00【大中小】

Fluorospark^® Kinase/ADP Multi-Assay Kit是和光(wako)與日本東京大學新藥研究機構共同研發的ADP熒光檢測試劑盒。擁有高通量篩選（HTS）必備的高靈敏度、高準確度、低成本、簡便等特性。本產品不僅可檢測激酶，同時可用于檢測產生ADP的酶（如ATP酶、乙酰基—CoA羧化酶）的活性。咨詢訂購熱線：400-021-8158

激酶分析篩選試劑盒
Fluorospark® 激酶/ADP多重檢測試劑盒(貨號291-77401)
Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit

Fluorospark(R) 激酶/ADP多重檢測試劑盒(#291-77401)

Fluorospark® 激酶/ADP多重檢測試劑盒

簡單快捷，高靈敏度定量檢測ADP。用紅色熒光“Resorufin”定量經激酶反應生成的ADP，可實時檢測。

激酶抑制劑的篩選
激酶活性測定
ADP產生酶活性分析

試劑盒原理

本試劑盒通過酶偶聯反應，簡單、高靈敏度地定量檢測ADP。經激酶反應生成的ADP，可用紅色熒光物質試鹵靈定量。

Fluorospark® 激酶/ADP多重檢測試劑盒檢測原理

優點/特點

● 適合終點(endpoint)和實時實驗
● 優異的Z'-factor數據（數據差異小）
● 高靈敏度檢測ADP量
● 檢測直到ADP 30 μmol/L仍可保持線性關系
● 一步反應，檢測時間短（~30分鐘）
● 成本較低

與傳統發光法比較

試劑名稱	Fluorospark^® Kinase	傳統發光法（A公司）
原理	ADP定量（熒光）（直接定量生成的ADP）	ADP定量（發光）（需要把生成的ADP變換成ATP再定量）
操作順序	1步	2步
所需時間	30分鐘	70~100分鐘
ADP定量范圍	~30 μmol/L	~1 mmol/L
價格	低成本

試劑盒組成

No. 試劑	用途	1,000次	10,000次
底物液	2×制備檢測液	9 mL	90 mL
酶液		500 μL	5 mL
刃天青液		100 μL	1 mL
還原封閉劑		400 μL	4 mL
D　終止液	停止偶聯反應	10 mL	100 mL
10 mmol/L ATP溶液	激酶反應，制作標準曲線	100 μL	1 mL
10 mmol/L ADP溶液	制作標準曲線	100 μL	1 mL

案列應用

【實驗流程（終點（endpoint）法）】

激酶反應液里添加等量的2×檢測液（使用時制備）即可檢測激酶活性

【制作ADP標準曲線】

用0、10、20、30 μmol/L ADP制作標準曲線。

良好的線性關系可定量最多至30 μmol/L的ADP。

【低濃度ADP區域里定量】

制作各ATP/ADP濃度（ATP+ADP=1,10,100 μmol/L）里底物變換率0-10%標準曲線

ATP/ADP標準曲線里底物變換率低（=ADP濃度低）時線性關系依然較好

【熒光信號的穩定性】

20 μmol/L ADP和2x檢測液混合，在30分鐘~7小時候檢測熒光強度。30分鐘后的熒光強度標準化為100%，相關變動表格如下。

ADP和2×檢測液混合后，在30分~7小時內的熒光信號十分穩定。

【數據：Z'-factor實測值】

定量與各ATP/ADP濃度（ATP+ADP=1,10,100 μmol/L），5%底物變換率相當的ADP時，本試劑盒方法與傳統發光法的Z'-factor比較。

Z'-factor：Fluorospark® Kinase >傳統發光法（A公司）
在各ATP濃度里，5%低底物變換率也有優異的Z'-factor。

【什么是Z'-facotr】

Z'-facotr是一個關于信號區間和變異的組合，它已成為評估測試方法質量的主要參數。使用Z'-factor=1-(3×SDH+3×SDL)/(AvH-AvL)公式計算（SDH和SDL為陽性對照和陰性對照的方差，AVH和AVL為陽性對照和陰性對照的平均值）。

Z-factor	Interpretation
1.0	理想情況下等于1.0。Z factor永遠不可能超過1.0。
0.5-1.0之間	較好的實驗。
0-0.5之間	臨界的實驗（較差的實驗）。
小于0	陽性對照和陰性對照的數值有很多重疊。

【制作抑制曲線】

制作cAMP-依賴性蛋白激酶(PKA)抑制劑H-89的抑制曲線（PKA 0.02U/μL，ATP 5μmol/L，Kemptide 125μg/mL及各濃度的H-89）

Fluorospark® Kinase與傳統發光法（A公司）有幾乎相同的IC50值。
（本方法得到的H-89 IC50值與文獻值*（IC50=40nmol/L）幾乎相同）
* Hidaka, H. et al., Methods Enzymol., 201, 328-39(1991).

【實驗流程（實時法）】

通過實時檢測熒光強度，實時檢測激酶活性。

【ADP定量反應時間的比較（實時檢測）】

對各濃度ADP［ADP=0, 0.25, 0.5, 1, 2μmol/L（ATP+ADP=10 μmol/L）］進行實時檢測。

Fluorospark® Kinase在約十分鐘內完成ADP定量反應。背景（ADP=0 μmol/L）信號穩定。

【實時檢測添加DTT的影響】

ADP=2 μmol/L（ATP+ADP=10 μmol/L）里添加還原劑DTT（0.1、1 mmol/L），進行實時檢測。

Fluorospark® Kinase在約十分鐘內完成ADP定量反應。即使DTT濃度增高，結果依然穩定。

【通過實時檢測計算PKA的Km（ATP）值】

在各種ATP濃度下通過實時檢測計算出PKA反應速度，并求取ATP的PKA（Km值）

根據實時檢測進行酶的動力學分析。
本方法得到的Km值與文獻值**（3~15 μmol/L）幾乎相同）
** Flockhart, D.A. and Corbin, J.D., CRC Crit. Rev. Biochem., 12, 133-86(1982).

產品列表

產品編號	產品名稱	規格	級別
291-77401	Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit Fluorospark® 激酶/ADP 多重檢測試劑盒	1000次	for Enzyme Activity Assay

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