高效液相色譜法（HPLC）測定黃曲霉素

來源：Seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發表時間：2012-01-30 10:45:00【大中小】

GB 5009.24-2010，NY/T 1664-2008，SN/T 1664-2005，GB/T 8381-2008，SN 0637-1997

HPLC法具有靈敏度和準確度高、方法重現性好等優點，現已成為黃曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法測定黃曲霉毒素，一般使用靈敏度和選擇性較好的熒光檢測器。但由于黃曲霉毒素的熒光強度會受溶劑影響，正相色譜中，B1和B2的熒光強度僅稍低一點，不需衍生化；而在常用的反相色譜中，B1和G1兩種異構體熒光強度很弱，需進行衍生化，提高其熒光強度，靈敏度才能滿足一般食品法規的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后兩類，柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、過溴化吡啶溴以及電化學和光化學等方法。近年來，很多標準方法利用免疫親合柱凈化，HPLC柱后衍生對花生和玉米等農產品和食品中黃曲霉的含量進行了分析，方法檢出限能夠達到1 μg/kg以下。

訂貨信息如下：

品名	級別	規格	應用	貯存及有效期
黃曲霉素B1	標準品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月
黃曲霉素B2	標準品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月
黃曲霉素G1	標準品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月
黃曲霉素G2	標準品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月
黃曲霉素M1	標準品		用于HPLC分析	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月
黃曲霉毒素M1免疫親和柱		25支/盒(1ml) 15支/盒（3ml)	用于HPLC進行黃曲霉毒素M1含量的檢測的樣品預處理	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月
黃曲霉毒素B1免疫親和柱		25支/盒	用于HPLC檢測的樣品預處理	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月
黃曲霉毒素總量免疫親和柱（B1/B2/G1/G2）			用于HPLC檢測的樣品預處理	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月2
乙腈	色譜級	500ml/瓶	用作流動相	常溫避光保存
甲醇	色譜級	500ml/瓶	用作流動相	常溫避光保存
黃曲霉毒素總量免疫親和柱（B1/B2/G1/G2/M1/M2)			可用于樣品中黃曲霉毒素總量（B1、B2、G1、G2、M1、M2）的樣品提取、凈化。	2~8℃，切勿冷凍，有效期為12個月

黃曲霉毒素親和柱使用原理

品名	使用原理
黃曲霉毒素M1免疫親和柱	測定的基礎是抗原抗體反應，抗體連接在柱體內，樣品中的黃曲霉毒素M1經過提取、過濾、稀釋，然后緩慢的通過黃曲霉毒素M1免疫親和層析柱，在免疫親和柱內毒素與抗體結合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他無關物質。用甲醇洗脫黃曲霉毒素M1，然后注入到分析儀器中用于檢測。
黃曲霉毒素B1免疫親和柱	同上
黃曲霉毒素總量免疫親和柱（B1/B2/G1/G2）	同上
黃曲霉毒素總量免疫親和柱（B1/B2/G1/G2/M1/M2)	同上

HPLC法分析食品中黃曲霉毒素B1，B2，G1，G2

一、實驗條件
色譜柱：UltimateTM XB-C18，5μm，4.6×150mm
檢測器：RF（熒光檢測器）
波長：Ex：360nm Em：420nm
溫度：柱溫40℃
流動相：水/乙腈/甲醇=6/1/3
流速：0.8ml/min
柱后衍生反應：
反應液：0.05%的碘液
流速：0.2 ml/min
樣品分析：飼料（用免疫親和柱前處理）

二、譜圖結果
色譜圖如下，其中峰1為G2組分，峰2為G1組分，峰3為B2組分，峰4為B1組分，分離效果較好。