酵母（S.pombe）直接轉(zhuǎn)化試劑盒

來源：Seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發(fā)表時間：2012-02-09 14:58:00【大中小】

酵母（S.pombe）直接轉(zhuǎn)化試劑盒

本品為分裂酵母（Schizosaccharomyces pombe）轉(zhuǎn)化試劑盒。向酵母培養(yǎng)液直接加入目標(biāo)質(zhì)粒和專用試劑，即可進行轉(zhuǎn)化。利用獨特技術(shù)，無需進行感受態(tài)細胞調(diào)制，經(jīng)過一晚培養(yǎng)即可直接導(dǎo)入菌體。可簡單進行多種基因破壞株的同時導(dǎo)入，因而可進行大量染色體組的篩選。請注意，本品的使用方法有適合少數(shù)檢體的“軟管法”和適合HT（高通量）的“96孔板法”兩種。

[特點]

·加入了目標(biāo)質(zhì)粒和專用試劑的一步完成型。
·感受態(tài)細胞無需調(diào)制。
·使用96孔板可進行多檢體處理。
·可使用軟管法
·適應(yīng)HT的低粘性試劑。

[試劑盒內(nèi)容]

	20次用	100次用	500次用
Sp Transformation Reagent	2.25ml X 1支	11.5ml X 1支	57ml X 1支
Carrier DNA(5mg/ml)	0.1ml X 1支	0.5ml X 1支	1.25ml X 2支

[操作方法1]

■ 96孔板法

96孔板
↓←加入25μl YES培養(yǎng)基
菌種接入
↓在28~30℃情況下靜置培養(yǎng)18~24小時
菌體懸濁
↓←將100μl質(zhì)粒和試劑混合液
在46℃的恒溫箱中放置2小時
10μl spotting
↓在28~30℃的恒溫箱中放置5~7日
轉(zhuǎn)化的酵母　
1）菌體接入時請使用YPD瓊脂培養(yǎng)基。使用YES瓊脂培養(yǎng)基可能導(dǎo)致較低的轉(zhuǎn)化率。準(zhǔn)備好的菌落可冷藏保存一個月。
2）* 質(zhì)粒·試劑混合液的調(diào)制

·Sp Transformation Reagent……90μl

·質(zhì)粒DNA……………………………1μg

·Carrier DNA………………………4μl

調(diào)制100μl滅菌水（處理多個受檢體時請按情況調(diào)制所需量）

3）在42℃中放置4小時或在37℃中放置6小時也可達到效果。

[操作方法2]

■ 軟管法

<酵母的培養(yǎng)>
2ml YES培養(yǎng)基
↓←菌種接入，調(diào)制至OD₆₀₀：0.2
↓←取1ml至14ml的試管中
↓←在28~30℃振蕩培養(yǎng),至OD₆₀₀：6.0~7.0
培養(yǎng)酵母液……（A）

<轉(zhuǎn)化>
1.5ml的離心管
↓←將100μl質(zhì)粒和試劑混合液混合
↓←加入25μl培養(yǎng)酵母液（A）在37℃恒溫箱中放置2小時
預(yù)處理
↓在28~30℃的恒溫箱中放置5~7天
轉(zhuǎn)化后的酵母
1）菌種接入時請使用YPD瓊脂培養(yǎng)基。使用YES瓊脂培養(yǎng)基可能導(dǎo)致較低的轉(zhuǎn)化率。準(zhǔn)備好的菌落（96孔板）可冷藏保存一個月。
2）菌體濃度會影響轉(zhuǎn)化率，請確認OD₆₀₀值
3）進行轉(zhuǎn)化，酵母液請準(zhǔn)備30次用的份量
4）* 質(zhì)粒·試劑混合液的調(diào)制

·Sp Transformation Reagent……90μl

·質(zhì)粒DNA……………………………1ug

·Carrier DNA……………………… 4μl

調(diào)制100μl滅菌水

[使用例子] 使用96孔板法進行轉(zhuǎn)化

用96孔板法進行轉(zhuǎn)化，在質(zhì)粒（Leucine合成酶標(biāo)識Marker）中加入S.pombe（Leucine合成酶破壞株）后，在SD培養(yǎng)基（-Leucine）里預(yù)處理和培養(yǎng)。

[使用次數(shù)]

	20次用	100次用	500次用
96孔板法	-	1板（100孔）	5板（500孔）
軟管法	20管	100管	500管

[轉(zhuǎn)化率] 250cfu/μg以上

追求高轉(zhuǎn)化率時，參照以下URL里的高效率轉(zhuǎn)化步驟（軟管法）。但是，此方法需要離心分離，會降低操作的簡便性。

[保存條件]-20℃保存

注）解凍產(chǎn)品請不要超過10次。為避免此狀況，建議預(yù)先細分成合適的劑量，再保存到-20℃的環(huán)境中。

[產(chǎn)品資料]

產(chǎn)品編號	品名	規(guī)格	容量
290-64301	S.pombe Direct Transformation Kit, Wako 酵母（S.pombe）直接轉(zhuǎn)化試劑盒	基因研究用	20次用
296-64303			100次用
294-64304			500次用