蛋白表達(dá)純化技術(shù)外包服務(wù)

來源：Seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發(fā)表時間：2012-03-09 15:03:00【大中小】

西寶生物蛋白分離純化平臺為您提供專業(yè)的蛋白表達(dá)純化外包服務(wù)，包括表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及原核蛋白表達(dá)純化、哺乳動物細(xì)胞蛋白表達(dá)純化等，終產(chǎn) 品可用于免疫學(xué)、結(jié)構(gòu)分析、擴大培養(yǎng)及其他多種實驗中。您還可以直接訂購從基因合成到蛋白表達(dá)純化的服務(wù)。

步驟1. 目標(biāo)基因全基因合成：

1. 從基因庫中搜索目標(biāo)蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫中有這個基因，免費提供給客戶。
2. 根據(jù)選用的表達(dá)系統(tǒng)對cDNA進行密碼子優(yōu)化，密碼子優(yōu)化。
3. 合成設(shè)計好的基因序列。

提供給客戶：目標(biāo)基因（在T載體或常規(guī)穿梭載體上）及測序報告。
價格：3.80元/堿基，如果客戶直接提供構(gòu)建好的質(zhì)粒，則免去這部分費用．
時間：2-3周，根據(jù)基因的大小而定.詳見全基因合成服務(wù)

步驟2. 目標(biāo)基因亞克隆：

1. 擴增并抽提含有目標(biāo)基因的載體質(zhì)粒。
2. 將目標(biāo)基因亞克隆到合適的表達(dá)質(zhì)粒上。
3. 測序驗證構(gòu)建質(zhì)粒的準(zhǔn)確性。
4. 免費提供如下表達(dá)載體：

Expression Vector	Promoter	Tag
pET3a, pET11a, pET24a	T7/ac	None or T7 Tag
pET32a	T7/ac	TRX & HIS
pET41a	T7/ac	GST & HIS
pET22b, pET25b, pET26b	T7/ac	Secret
pET28a, pET15b, pRSETb	T7/ac	HIS
pET50b, pET43a	T7/ac	Nus, HIS
pPEPTIDE	T7/ac	HIS
pMAL-c2x	T7/ac	MBP
pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P	T7/ac	GST
pQE30	T5	HIS
pTrcHisB	Trc	T7, HIS
pTWIN	T7/ac	Intein, CBD
pBV220	PRPL	None

提供給客戶：正確構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒，含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測序報告。
價格：免費　
時間：1-2周

步驟3. E. coli表達(dá)菌株轉(zhuǎn)化及篩選：

1. 擴增并抽提構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒。
2. 將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到高效的E.Coli表達(dá)菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養(yǎng)基中擴增并誘導(dǎo)表達(dá)目標(biāo)蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養(yǎng)后中目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標(biāo)蛋白的表達(dá)。
5. 可提供表達(dá)菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供給客戶：重組質(zhì)粒的表達(dá)菌株及表達(dá)檢測報告。
價格：免費
時間：1周

步驟4. 目標(biāo)蛋白表達(dá)及純化：

1. 搖瓶培養(yǎng)1L重組細(xì)菌，誘導(dǎo)表達(dá)目標(biāo)蛋白。
2. 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標(biāo)簽，再純化獲得所需的目標(biāo)蛋白（可選，構(gòu)建表達(dá)載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5. 通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。

提供給客戶：純化好的目標(biāo)蛋白1~5mg及純化報告。
價格：

1. 如果目標(biāo)蛋白含有親和標(biāo)簽（His-tag or GST-tag）
    5,000元（目標(biāo)蛋白純度>80%，不切除標(biāo)簽）
    5,500元（目標(biāo)蛋白純度>90%，不切除標(biāo)簽）
    6,000元（目標(biāo)蛋白純度>80%，切除標(biāo)簽）
    6,500元（目標(biāo)蛋白純度>90%，切除標(biāo)簽）

2. 如果目標(biāo)蛋白不含有親和標(biāo)簽
8,000元（目標(biāo)蛋白純度>80%）
9,000元（目標(biāo)蛋白純度>90%）

3. 如果沒有獲得目標(biāo)蛋白，則不收取任何費用(僅限客戶直接提供構(gòu)建好的質(zhì)粒時)。

時間：2~3周

備注： 1. 因為每個重組蛋白的表達(dá)量及純化得率都不相同，我們最終根據(jù)實際情況將給客戶提供最少1mg，最多10mg的目標(biāo)蛋白，所收取的費用是相同的。
2. 我們提供的最終產(chǎn)品一般為保存于常規(guī)的緩沖液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液）中蛋白質(zhì)溶液，并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。
3. 每次Western blot檢測最多7個樣品，因為要加入陽性對照，陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測，如果需要更多次檢測則費用為1500元/次。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗，如果客戶需要使用其他一抗，則需要客戶提供。詳見 Western Blot 檢測服務(wù)。