5分鐘“get”生物制藥中細胞培養的關鍵要點
細胞培養在生物制藥中有著廣泛的應用。它是一種利用細胞生長和分裂的能力來生產藥物的方法。通過細胞培養技術，我們可以大規模地生產各種藥物，如蛋白質藥物、抗體藥物和疫苗。
細胞培養技術在生物制藥中的應用不僅可以提高藥物的生產效率，還可以減少對動物實驗的依賴，從而降低了藥物研發的成本。然而，細胞培養也面臨著一些挑戰，如細胞的穩定性、培養條件的優化等。因此，我們需要不斷改進和優化細胞培養技術，以滿足不斷增長的藥物需求。
下面是細胞培養的一般流程：
細胞培養流程圖（圖片來源于網絡）
細胞株的選擇
CHO-K1細胞（FBQ1056A）
CHO-K1細胞是未經改造的野生型CHO細胞，具有較高的生長速度和較好的細胞質質量。CHO-K1是一種無血清培養的細胞系，這意味著它們可以在無需添加胎牛血清的培養基中生長和繁殖。CHO-K1細胞具有許多優點，使其成為生物制藥領域中常用的細胞系之一。首先，CHO-K1細胞具有較高的蛋白質表達能力，可以有效地表達各種外源蛋白。其次，CHO-K1細胞對許多病毒和細菌的感染性較低，這使得它們在生產重組蛋白和疫苗時更加安全可靠。此外，CHO-K1細胞的遺傳穩定性較高，可以保持長時間的穩定表達。
來源：Cricetulus griseus (ZG倉鼠) 卵巢
形態：表皮細胞
生長特性：貼壁
注釋：CHO-K1由CHO衍生而來，CHO是T. T. Puck 在1957年從一只成年ZG倉鼠卵巢獲得的。
培養液：Ham's F12K （含2 mM L-谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3）， 10% 胎牛血清。
傳代：吸去培養液。用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會YZ胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養箱內約5分鐘，直到細胞都脫落。加6-8毫升培養液，用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。（以1：4到1：8為宜，傳代期間培養液更換1-2次）
凍存：95%培養液+5% DMSO凍存于液氮。
CHO-S細胞（FBQ0790A）
CHO-S細胞是一種變異的中國倉鼠卵巢細胞系，其特點是生長快速、易于培養和維持穩定的基因表達。CHO-S細胞在生物制藥中的應用很廣泛，特別是在重組蛋白質的生產中及單抗藥物生產中。由于CHO-S細胞具有較高的蛋白質表達能力和較好的翻譯后修飾能力，使其成為理想的生產宿主細胞。此外，CHO-S細胞還具有較低的病毒感染率和較高的細胞存活率，使其在生產過程中更加可靠和穩定。
HEK293細胞（FBQ0262A）
HEK293細胞極少表達細胞外配體所需的內生受體，且比較容易轉染，是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。293細胞的一個衍生株：293T/17（FBQ0507A）的轉染效率更高，成為廣大研究者研究基因功能的一個強大工具。
來源：人體腎臟
形態：上皮細胞
生長特性：貼壁
注釋：該細胞含腺病毒5 DNA 。
培養液： MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉）， 10% 馬血清（熱滅活）。
傳代： 吸去培養液。 用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。 加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養箱內約5分鐘，直到細胞都脫落。 加6-8毫升培養液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養器皿中。（以1：2到1：4為宜，傳代期間培養液2-3天更換1次）
凍存：95%培養液+5%DMSO凍存于液氮。
Vero細胞（FBQ0896A）
Vero細胞被成功的用來培養狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗，在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻，在醫藥研究種廣泛應用。
來源：非洲綠猴腎細胞
形態：上皮細胞
生長特性：貼壁
注釋：該細胞是日本千葉大學的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日從一只正常的成年非洲綠猴腎組織培養出來的。
培養液：MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉）， 10%胎牛血清
傳代：吸去培養液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會YZ胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養箱內約5分鐘，直到細胞都脫落。加6-8毫升培養液，用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。（以1:3至1:6為宜，傳代期間培養液每周更換2-3次）
凍存： 95%培養液+5%DMSO凍存于液氮。
培養基的準備
準備適合細胞生長和生產的培養基。培養基通常包含營養物質、生長因子、激素和其他必要的成分，以滿足細胞的需求。
CHO細胞化學成分限定培養基
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貨號
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產品名稱
|
規格
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特點
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SeeBM01 CHO基礎培養基(液體)
|
1L
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無動物源，化學成分限定培養基，不含水解物和生長因子。適用于CHO-K1SV。
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|
SeeBM01 CHO基礎培養基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeBM02 CHO基礎培養基(液體)
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1L
|
無動物源，化學成分限定培養基，不含水解物和生長因子。適用于CHO-K1細胞系。
|
|
|
SeeBM02 CHO基礎培養基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeBM03 CHO基礎培養基(液體)
|
1L
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無動物源，化學成分限定培養基，不含水解物；含有微量生長因子。適用于CHO-K1細胞系。
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|
|
SeeBM03 CHO基礎培養基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeFM01 CHO補料培養基(液體)
|
1L
|
液體補料A 含有60g/L 的葡萄糖（干粉不含葡萄糖），補料 B 不含葡萄糖。
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|
SeeFM01 CHO補料培養基(干粉)
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10L、100L
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HEK293細胞化學成分限定培養基
|
貨號
|
產品名稱
|
規格
|
特點
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SeeHEK293CD01基礎培養基(液體)
|
1L
|
無動物源，化學成分限定培養基，不含水解物，含微量生長因子適用于293F、293T、expi293細胞，用于蛋白表達、病毒轉染。
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|
|
SeeHEK293CD01基礎培養基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeHEK293CD02基礎培養基(液體)
|
1L
|
無動物源，化學成分限定培養基，不含水解物和生長因子。Expi 293 做抗體瞬轉。
|
|
|
SeeHEK293CD02基礎培養基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeHEK293CD03基礎培養基(液體)
|
1L
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無動物源，化學成分限定培養基，不含水解物和生長因子。293F/T做病毒瞬轉。
|
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|
SeeHEK293CD03基礎培養基(干粉)
|
10L、100L
|
||
|
SeeHEK293FM01補料培養基(液體)
|
1L
|
液體補料A 含有60g/L 的葡萄糖（干粉不含葡萄糖），補料 B 不含葡萄糖。
|
|
|
SeeHEK293FM01補料培養基(干粉)
|
10L、100L
|
Vero細胞化學成分限定培養基
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貨號
|
產品名稱
|
規格
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特點
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|
SeeVero 01基礎培養基(液體)
|
1L
|
無動物源，化學成分限定培養基，不含水解物和生長因子。
|
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|
SeeVero 01基礎培養基(干粉)
|
10L、100L
|
細胞的擴增
將選定的細胞株接種到培養皿或生物反應器中，提供適當的環境條件，如溫度、濕度和氧氣含量，促進細胞的生長和分裂。
細胞的維持和監測
定期檢查和維護細胞的健康狀態，包括細胞密度、細胞活力和污染情況。必要時，可以進行細胞的傳代，以保持細胞的活力和穩定性。
目標產物的表達和分泌
通過調節培養條件和添加適當的誘導劑，促使細胞產生目標藥物或生物制品，并將其分泌到培養基中。
IPTG（異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷）（ECJ0025D）可用于盡量增加表達載體中的基因表達。當用抗體篩選 λ 噬菌體庫時，通過防止融合蛋白的表達直至建立菌斑塊，可以提升成功概率。
產品信息
|
英文名
|
IPTG（ECJ0025D）
|
|
別名
|
異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷；異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖甙
|
|
分子式
|
C9H18O5S
|
|
分子量
|
238.3012
|
|
CAS
|
367-93-1
|
檢測指標
|
Assay
|
98.0~101.0%
|
|
Purity（HPLC）
|
≥98.0%
|
|
Identification
|
Complies
|
|
Moisture content
|
≤1.0%
|
|
PH（5% aq.）
|
5.0~7.0
|
|
Solubility
|
Soluble in water and methanol
|
|
OD300nm
|
≤0.15（5% aq.）
|
|
OD400nm
|
≤0.06（5% aq.）
|
|
Melting point
|
110~114℃
|
|
1,4-dioxane
|
Negative
|
|
Specific rotation
|
-34.5°～-28.5°
|
|
Shape and properties
|
White crystalline powder
|
收獲和純化
當目標產物達到一定的產量后，可以收獲細胞培養物，并進行后續的純化和提純步驟，以獲得高純度的目標藥物。
產品的測試和分析
對收獲的產品進行質量控制和分析，確保其符合規定的質量標準和純度要求。
西寶生物提供細胞培養相關試劑列表
|
品牌
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貨號
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中文名稱
|
規格
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CAS
|
用途
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|
Seebio
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中國倉鼠卵巢細胞；CHO-K1
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|
細胞系
|
|
|
Seebio
|
中國倉鼠卵巢細胞；CHO
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|
|
細胞系
|
|
|
Seebio
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CHO-S 中國倉鼠卵巢細胞(懸浮）
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|
細胞系
|
|
|
Seebio
|
非洲綠猴腎細胞；VEROC1008(E6)
|
|
|
細胞系
|
|
|
Seebio
|
非洲綠猴腎細胞；VERO
|
|
|
細胞系
|
|
|
Seebio
|
MDBK；牛腎細胞
|
|
|
細胞系
|
|
|
Seebio
|
人胚腎細胞；HEK-293 STR
干粉，CHO-K1培養基，不含水解物和生長因子
|
|
|
細胞系
|
|
|
Wako
|
PSFM-J1 Medium Wako, Liquid
PSFM-J1昆蟲細胞培養基 |
500 mL
|
|
液體，適用于Sf9、Sf21、H5等細胞
|
|
|
Wako
|
PSFM-J2 Medium Wako, Liquid
PSFM-J2昆蟲細胞培養 |
1L
|
|
液體，適用于Sf9、Sf21、H5等細胞
|
|
|
Seebio
|
SeeVero 01基礎培養基(液體)
|
1L
|
|
液體，Vero細胞專用培養基
|
|
|
Seebio
|
SeeVero 01基礎培養基(干粉)
|
10L,100L
|
|
干粉，Vero細胞專用培養基
|
|
|
Seebio
|
SeeBM02 CHO基礎培養基(液體)
|
1L
|
|
液體，CHO-K1培養基，不含水解物和生長因子
|
|
|
Seebio
|
SeeBM02 CHO基礎培養基(干粉)
|
10L,100L
|
|
||
|
Seebio
|
SeeBM03 CHO基礎培養基(液體)
|
1L
|
|
液體，CHO-K1培養基，不含水解物；含有微量生長因子
|
|
|
Seebio
|
SeeBM03 CHO基礎培養基(干粉)
|
10L,100L
|
|
干粉，CHO-K1培養基，不含水解物；含有微量生長因子
|
|
|
Seebio
|
優級胎牛血清
|
500ml
|
|
來源烏拉圭，FBS
|
|
|
Seebio
|
小牛血清
|
100ml, 500ml
|
|
小牛血清，BCS
|
|
|
Seebio
|
胰蛋白酶（豬胰）1：250
|
5g，50g
|
9002-07-7
|
消化粘附蛋白并將細胞釋放到培養基中
|
|
|
Seebio
|
二甲基亞砜(DMSO)
|
500ml,4L
|
67-68-5
|
細胞凍存時，保護細胞
|
|
|
Seebio
|
L-谷氨酰胺(Gln)
|
50g,500g
|
56-85-9
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-賴氨酸
|
100g,500g
|
56-87-1
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-酪氨酸
|
25g,100g
|
60-18-4
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-異亮氨酸
|
100g,1kg
|
73-32-5
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-丙氨酸
|
100g,500g,1kg
|
56-41-7
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-精氨酸
|
100g,500g
|
74-79-3
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-脯氨酸
|
100g,1kg
|
147-85-3
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-亮氨酸
|
25g,100g
|
61-90-5
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-纈氨酸
|
100g,1kg
|
72-18-4
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-色氨酸
|
25g,100g,1kg
|
73-22-3
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-半胱氨酸
|
100g
|
52-90-4
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-組氨酸
|
5g,25g,100g
|
71-00-1
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
甘氨酸
|
500g,1kg,25kg
|
56-40-6
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-甲硫氨酸
|
25g,100g,500g
|
63-68-3
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-谷氨酸(Glu)
|
100g,500g
|
56-86-0
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-胱氨酸
|
5g,25g
|
56-89-3
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-絲氨酸
|
25g,100g,1kg
|
56-45-1
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-苯丙氨酸
|
100g,500g
|
63-91-2
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
L-蘇氨酸
|
25g,100g
|
72-19-5
|
細胞培養添加劑
|
|
|
Seebio
|
酚紅
|
25g
|
143-74-8
|
觀察和監測細胞培養過程中細胞的生長和增殖情況
|
|
|
Seebio
|
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)
|
25g,100g
|
367-93-1
|
蛋白表達誘導劑
|
|
|
Seebio
|
OED14K發酵工業專用消泡劑
|
250g，1Kg
|
|
消泡劑
|
|
|
Seebio
|
OED24K發酵工業專用消泡劑
|
250g，1Kg
|
|
消泡劑
|
西寶生物提供高品質細胞培養相關試劑，咨詢服務熱線：400-021-8158或021-50272975。
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