His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)(IDA)

來源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發(fā)表時(shí)間：2012-07-18 11:00:00【大中小】

1、概述

金屬螯合層析，又稱固定化金屬離子親和層析（Immobilized metal ion affinity chromatography，IMAC）。該法利用蛋白質(zhì)表面的某些氨基酸（如組氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和金屬離子（Cu²⁺、Zn²⁺、Ni²⁺等過渡金屬離子）發(fā)生特殊的相互作用的原理來實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離。瓊脂糖親和介質(zhì)（Ni）是將金屬離子Ni²⁺螯合在瓊脂糖凝膠上形成的一種親和層析介質(zhì)，具有吸附容量大、選擇型好、易于再生、成本低等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)及多肽的分離純化，尤其是組氨酸標(biāo)記蛋白質(zhì)的高效純化。

2、瓊脂糖親和介質(zhì)（Ni）的應(yīng)用

純化組氨酸標(biāo)記的乳酸脫氫酶

層析柱：6.4 cm ×1.0 cmI.D.，CV=5 ml
        樣品：組氨酸標(biāo)記的LDH發(fā)酵液（0.45μm濾膜過濾，上樣10ml）
        流速：1ml/min
       平衡緩沖液（A）：20mM PB +0.1MNaCl +50mM咪唑, pH 7.4
        洗脫緩沖液（B）：20mM PB +0.1MNaCl +0.5M咪唑, pH 7.4
        1: 發(fā)酵液
        2: 本介質(zhì)的流穿峰P0
        3: 本介質(zhì)的洗脫峰P1
        4: 進(jìn)口介質(zhì)的流穿峰P0
        5: 進(jìn)口介質(zhì)的洗脫峰P1

西寶提供的瓊脂糖親和介質(zhì)（Ni）從發(fā)酵液中純化His-tag LDH（組氨酸標(biāo)記的乳酸脫氫酶），并與進(jìn)口介質(zhì)相比較。上圖為瓊脂糖親和層析介質(zhì)（Ni）純化LDH的色譜圖和電泳分析圖。結(jié)果顯示中心生產(chǎn)的瓊脂糖親和層析介質(zhì)（Ni）與進(jìn)口同類產(chǎn)品的純化效果相當(dāng)。活性分析結(jié)果表明，采用本中心生產(chǎn)的瓊脂糖親和層析介質(zhì)（Ni）純化得到的LDH的活性回收率達(dá)到80%以上，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)進(jìn)口介質(zhì)的替代。

3、產(chǎn)品與服務(wù)

西寶可提供IDA（亞氨基二乙酸）、NTA（次氨基三乙酸）和CM-ASP（羧甲基天冬氨酸）三種不同螯合配體的Ni金屬螯合介質(zhì)，并可根據(jù)客戶需求提供螯合其它金屬離子（Cu²⁺、Co²⁺、Zn²⁺、Fe³⁺等）的介質(zhì)。此外，為了解決金屬離子殘留問題，本中心還開發(fā)了未螯合金屬離子的空白膠，用于吸附去除產(chǎn)品中殘留的金屬離子。

4、規(guī)格

產(chǎn)品名稱	鎳親和介質(zhì)
配基密度	15 ~120mmol/mL
pH穩(wěn)定性	3 ~ 13
粒徑范圍(μm)	45 ~ 165
最大流速(cm/h)	400
應(yīng)用	用于含組氨酸標(biāo)簽蛋白的純化
規(guī)格	50mL
	250 mL
	1 L

西寶提供的介質(zhì)如下：

產(chǎn)品名稱	瓊脂糖親和介質(zhì)（鎳）	瓊脂糖親和介質(zhì)（谷胱甘肽）	瓊脂糖親和介質(zhì)（肝素）	瓊脂糖親和介質(zhì)（藍(lán)膠）	瓊脂糖親和介質(zhì)（蛋白A）
配基密度（ml介質(zhì)）	15~120mmol	20~30 mmol	5 mg	7-10 μmol	6 mg
載量（ml介質(zhì)）	20~30mg（LDH）	10mg GST	2mg抗凝血酶III	20mgBSA	35mgIgG（兔）
pH穩(wěn)定性	3-13	3-12	4-12	4-12	2-11
粒徑范圍(μm)	45-165	45-165	45-165	45-165	45-165
最大流速(cm/h)	500	450	500	500	450
應(yīng)用	用于含組氨酸標(biāo)簽蛋白的純化	用于含GST標(biāo)簽蛋白的純化	用于抗凝血酶III、凝血因子及干擾素等蛋白的純化	用于白蛋白、干擾素、脂蛋白、凝聚因子等蛋白的純化	用于多種抗體的純化