ATP發光檢測試劑盒 ATP-Lite Assay Kit

來源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發表時間：2012-07-20 09:07:00【大中小】

ATP，是生命體基本的能量分子，一種通用的能量“貨幣”。ATP參與多種酶促反應，維持正常的生命活動。通過ATP檢測，可以間接定量測定細菌、細胞的數量和活性狀態，了解體外ATP參與的酶促反應的進程，在生物檢定和生命科學研究中有廣泛的應用。本試劑盒采用生物發光(bioluminescent)法，依據熒光素酶(luciferase)催化底物熒光素的轉化，利用ATP的能量，發射出光子。螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase)催化的發光反應，與ATP濃度具有很好的線性依賴關系和極高的敏感性，ATP的檢測靈敏度達到10^-13mol。本試劑盒采用優化的酶反應體系，使發光反應持續數十分鐘，以便于手工操作多個樣品。操作簡便，可快速獲得結果。

產品內容與儲存方法：

名稱	數量	保存條件
100x Lysis Buffer (細胞裂解液)	1 ml	-20℃
ATP Assay Buffer (反應緩沖液)	10 ml	-20℃
Luciferin	0.5 ml	-20℃
Firefly luciferase	1 ml	-20℃
ATP (1 mM)	0.5 ml	-20℃

可作200次以上ATP檢測。低溫運輸，-20℃或-80℃避光保存。有效期6個月。

所需其它試劑：使用者需準備PBS 、雙蒸水等。

操作方法：

樣品準備：

對于細胞或微生物樣品，應首先提取ATP。本試劑盒提供培養哺乳細胞的ATP提取方法如下。其它標本來源的ATP提取，一般可用三氯乙酸的提取方法，或參照文獻一些有效提取方法進行。對體外酶促反應樣品，一般可直接用雙蒸水稀釋后進行檢測。樣品中ATP含量應稀釋到0.1 mM一下，以保證在測定的線性范圍內。

培養哺乳細胞樣品準備：

1) 配制裂解液：臨用前，取適量100x Lysis Buffer (ULB)，用雙蒸水稀釋至1xLB，混勻。1xLB可長期凍存于-20℃。

2) 細胞清洗：傾去培養板/皿中的培養液，加入足量PBS，輕輕洗滌細胞。完全傾去洗滌液。

3) 細胞裂解：在孔/皿中加入足量1xLB，混勻。培養板可在微型振蕩器上震蕩5~10 min；培養皿可直接用細胞刮刀刮下細胞，將細胞懸液移入1.5 ml離心管，在渦旋振蕩器上充分混懸震蕩30秒。裂解細胞懸液可直接用于發光測定，也可離心30秒，取上清做發光測定。裂解細胞含量較多時，可將樣品用雙蒸水稀釋，以保證在測定ATP的線性范圍內。

配制發光反應液：

測定前，在室溫待ATP Assay Buffer和Luciferin溶化，混勻（注意避光）。按20/1比例用ATP assay Buffer稀釋Luciferin，再加入1/10體積的Luciferase，配制所需體積的Assay Reagent（注意避光），置冰上待用。

配制ATP標準液：

測定前，在室溫待ATP溶化，用雙蒸水或1xLB稀釋成一定濃度梯度的溶液。該濃度梯度應在0.1 nM~0.1 mM的濃度范圍內的一定區間，并涵蓋樣品ATP濃度的測定范圍。

測定儀器的設置：

按儀器操作說明開啟發光測定儀。手動操作型儀器，將測讀時間設為10-20秒。自動操作型儀器，一般將測定延遲設為2秒，將測讀時間設為10-20秒，Assay Reagent的注入體積設定為50 μl。

手動發光測定：

取待測樣品5 μl加入測量管底部，取Assay Reagent 50 μl加入管底部，輕輕敲擊管壁3~5次混勻，放入儀器中立即測定，記錄發光值為Firefly luciferase的發光單位(RLU)。如用多孔板同時手動測定多個樣品，則將各待測樣品5 μl分別加入連續的各孔底部，用多道加樣器于各孔底加入Assay Reagent 50 μl，輕輕敲擊板側3~5次混勻，放入儀器中立即測定，記錄發光值為Firefly luciferase的發光單位(RLU)。