檢測ALS相關SOD1突變體的混合型抗體

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-10-18 15:31:00【大中小】

檢測ALS相關SOD1突變體的混合型抗體

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono（MS785/MS27）

本產品為兩種針對SOD1突變體的抗體混合物。SOD1突變體被認為是導致神經性疾病肌萎縮性側索硬化(ALS)的原因之一，本產品可特異性識別SOD1突變體的共通二級結構，并且通過免疫沉淀后以Western blot或免疫染色等方法可以檢測出上百種SOD1突變體。

另外，本混合型抗體也適用于缺鋅性內質網應激相關的SOD1研究。詳細請瀏覽“MEMO——鋅缺乏和SOD1立體結構變化”。

※ 本產品僅供研究。研究以外不可使用。

※ 本產品基于東京大學藥學系研究科細胞情報學教室的研究成果產品化而成。

免疫沉淀后突變體SOD1的檢測實例

在HEK293細胞中表達野生型以及不同突變型SOD1，裂解細胞后添加各抗體（MS785：5 μg/mL, MS27：2 μg/mL, MS785/MS27混合：1 μg/mL）并反應10小時，然后使用Protein G 磁珠進行免疫沉淀。結果顯示，MS785和MS27在經過免疫沉淀反應后，未識別出野生型（WT）但與突變體特異性結合。在抗原位點出現突變時，MS785和MS27無法單獨識別，但是補充MS785/MS27混合體后，即可檢測出來。

◆肌萎縮性側索硬化（ALS）與SOD1

肌萎縮性側索硬化(ALS；Amyotrophic Lateral Sclerosis)是一種由于運動神經的細胞死亡導致全身骨骼肌無力、主要癥狀為肌肉萎縮的神經退行性疾病。90%的ALS為非遺傳性發病，10%左右為遺傳性發病，并且已經鑒定出了約20種致病基因。其中因氧化還原酶SOD1（Cu/Zn Superoxide Dismutase）的突變導致發病的案例最多，而表達SOD1突變體的轉基因小鼠也作為ALS的動物模型使用。借助各種研究手段我們有望闡明由SOD1突變導致的ALS發病機理。

SOD1是一種在活性中心帶有銅離子與鋅離子的金屬酶，主要負責分解細胞內產生的活性氧。雖然SOD1是一種相對較小的蛋白，只有154個氨基酸（人）、分子量僅為24 kDa，但是卻有著上百種突變體（圖1）。這些突變體基本不會影響分解天然活性氧的酶活性。因此，研究認為，ALS的發病中存在著酶活性以外的其他因素，而伴隨突變的毒性獲得（toxic gain of function）被視為極有可能的因素。

原本，野生型SOD1形成二聚體，但有關SOD1突變體，東京大學一條秀憲教授等人已澄清了的以下要點：

●　上百種各形各式的SOD1突變體采用了與野生型SOD1不同的共通二級結構（圖2）。

●　通過與內質網中的蛋白降解途徑（ERAD）的構成蛋白Derlin-1相結合獲得細胞毒性。

并且，以SOD1突變體與Derilin-1結合位點為基礎，成功開發出能夠特異性識別突變體立體結構的大鼠單克隆抗體，克隆MS785和MS27。這些抗體作為闡明SOD1突變引發的ALS發病機制的優秀工具備受期待。

圖1 報告中SOD1突變位點的案例

圖2 SOD1野生型與突變體的結構區別以及抗體識別位點

◆特點

●　混合了抗SOD1大鼠單克隆抗體克隆MS785和克隆MS27的混合型抗體。

※　亦可分別購入克隆MS785、MS27。

●　克隆MS785和MS27識別SOD1突變體共通的單體二級結構，且擁有在免疫沉淀后檢測出上百種SOD1突變體的實績。

●　可以通過免疫細胞染色法特異性檢測SOD1突變體。

●　在缺鋅條件下可以檢測作為內質網應激的原因之一的野生型SOD1二級結構變化。適用于內質網應激研究和SOD1基礎研究。詳細請瀏覽“MEMO——鋅缺乏和SOD1二級結構改變”。

◆抗體信息

克隆名	MS785	MS27
抗體種類	大鼠單克隆抗體
同種型	IgG2b/κ	IgG2a/κ
交叉性	人
性狀	Protein G純化（0.5 mg/mL），storage buffer：50％甘油／PBS

■　關于克隆MS785與MS27的區別

●　MS785是以人SOD1的6~16氨基酸序列，MS27是以人SOD1的30~40氨基酸序列分別作為抗原制備的單抗。

●　均可廣泛地檢測突變體，但無法檢測到某些每個表位均有突變的特定突變體。

●　由于MS785和MS27有互補性，所以混合型抗體可以補全抗原位點突變體的檢測。

◆應用

●　免疫沉淀，免疫染色：突變體檢測

●　ELISA：突變體檢測（詳細請參考原著文獻2。）

●　Western blot：同時檢測突變體與野生型

注意：在變性狀態下，不僅會檢測到SOD1突變體，也會檢測到野生型SOD1。因此，實驗過程中必須防止蛋白變性，請勿使用SDS等變性劑。

◆原著文獻

1.　Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012). "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

2.　Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015). "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

◆通過免疫染色對SOD1突變體的檢測實例

在HEK293細胞表達野生型以及G93A突變體SOD1（FLAG融合蛋白），分別使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合型抗體（紅）和抗FLAG抗體（綠）進行免疫染色（工作濃度：1 μg/mL）。可以確認，野生型以及G93A突變體均倍倍抗FLAG抗體檢測到信號，但是MS785、MS27以及MS785/27混合型抗體均不與野生型反應，僅與突變體反應。

◆缺鋅狀態下野生型SOD1的檢測實例

本抗體可檢測出缺鋅時野生型SOD1的動態結構變化。不僅ALS研究，也適用于SOD1的基礎研究。

●　本產品有在血清缺乏條件以及鋅螯合劑TPEN處理下檢測出內源性野生型SOD1的檢測實例。

●　MS785、MS27以及混合物都可用于檢測。

鋅缺乏和SOD1立體構造改變

OD1是擁有鋅離子的金屬蛋白。東京大學的一條教授等人明確，在缺鋅狀態下野生型SOD1會釋放鋅離子，改變二級結構，并采取SOD1突變體相似的單體結構。這種結構變化，令原本不結合的內質網相關性降解（ERAD）蛋白Derlin-1獲得結合能力，誘導了ER 應激（內質網應激）。即使是野生型SOD1，本產品也能識別出缺鋅狀態下的立體結構變化，檢測出缺乏鋅的SOD1。因此適用于SOD1基礎研究以及ER應激研究。

參考文獻：

1. Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012). "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

2. Homma, et al., Molecular Cell, 52, 75～86 (2013). "SOD1 as a Molecular Switch for Initiating the Homeostatic ER Stress Response under Zinc Deficiency."

3. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015). "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

將HEK293細胞用10 μM鋅螯合劑TPEN處理8小時。細胞裂解后，分別使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合抗體進行免疫沉淀。由于鋅離子的缺失，內源性野生型SOD1與SOD1突變體同樣被MS785、MS27檢測出來。

◆儲存溫度

20°C

◆產品列表

產品編號	產品名稱	包裝
FDV-0021A	Anti-SOD1(ALS-related mutants)Cocktail, Human, Rat-Mono(MS785/MS27) Anti-SOD1（ALS相關突變體）混合型，人，大鼠單克隆（MS785/MS27）	100 μg
FDV-0021B	Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS785) Anti-SOD1（ALS相關突變體）,人，大鼠單克隆（MS785）	100 μg
FDV-0021C	Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS27) Anti-SOD1（ALS相關突變體）,人，大鼠單克隆（MS27）	100 μg