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BINKIT(R) NK 細胞擴增套裝（外周血單核細胞來源）

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-11-06 09:28:00【大中小】

細胞結(jié)團的原因

懸浮細胞可能由于各種原因相互附著并發(fā)生結(jié)團。細胞結(jié)團常見的原因是在細胞裂解之后，培養(yǎng)基中存在游離DNA和細胞碎片，DNA的粘性使細胞和其他碎片聚集成大的團塊。

工藝培養(yǎng)過程中分析細胞結(jié)團的原因來自兩方面：

1 動物細胞本身可能存在固有的細胞結(jié)團現(xiàn)象，如CHOS細胞；

2 動物細胞在遇到不良的營養(yǎng)條件和環(huán)境，也容易發(fā)生細胞聚集現(xiàn)象，以及培養(yǎng)基中Ca2+等離子的濃度也會影響細胞黏附[1]。

聚團后的影響

細胞微環(huán)境會發(fā)生惡化如：

氧氣供應(yīng)不足
代謝廢物積累
營養(yǎng)物不足等
細胞死亡

如何抗細胞結(jié)團？

抗細胞結(jié)團常采用的物質(zhì)是多硫酸化合物，例如：肝素鈉、硫酸乙酰肝素、蘇拉明和硫酸葡聚糖。在多種多硫酸鹽化合物中，硫酸葡聚糖是在CHO細胞懸浮培養(yǎng)中應(yīng)用廣泛的抗結(jié)團劑。

硫酸葡聚糖抗細胞結(jié)團原理

葡聚糖硫酸鈉（Dextran sulfate sodium salt，DSS）是葡聚糖的聚陰離子衍生物，由葡聚糖和氯磺酸的酯化反應(yīng)形成，以鈉鹽形式提供，并通過添加少量磷酸鹽進行穩(wěn)定。

不同分子量和濃度的硫酸葡聚糖的影響[1]

2016年，科學(xué)家研究了硫酸葡聚糖的三種不同分子量（4000Da、15000Da和40000Da，其對應(yīng)的S比例分別為3-6%、17-19%和15-19%），以及不同濃度（0.1-1.0g/L）對兩種不同重組CHO細胞（CHO-K1細胞和DG44細胞）的生長和單克隆抗體產(chǎn)量影響。并同時評估添加硫酸葡聚糖對單抗的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（如聚體、電荷變化和N-糖基化等)的影響。

前期研究發(fā)現(xiàn)，采用200000Da的硫酸葡聚糖，無論使用哪種濃度（0.1-1.0g/L），都會使活細胞密度和抗體濃度降低20-30％。說明采用200000Da的硫酸葡聚糖對細胞來說是有害。添加上述不同分子量不同濃度的硫酸葡聚糖對于CHOK1細胞，可以顯著維持培養(yǎng)后期細胞密度和活力，需要注意的是最終抗體表達并未對應(yīng)提高。

而對于DG44細胞添加硫酸葡聚糖，尤其是40,000Da分子量對于DG44細胞，細胞聚集會大大降低。并且顯著提高了抗體產(chǎn)物濃度。

另外通過硫酸葡聚糖對抗體質(zhì)量屬性的影響研究表明對于DG44細胞添加4000Da和15000 Da硫酸葡聚糖對單克隆抗體的電荷異構(gòu)體無影響(P<0.05)，只有添加40,000Da硫酸葡聚糖才顯著降低堿性電荷異構(gòu)體(P<0.05)[1]；

添加硫酸葡聚糖對單克隆抗體的質(zhì)量屬性(聚體、電荷異構(gòu)體和N -糖基化)沒有負面影響，甚至可以對部分質(zhì)量屬性產(chǎn)生積極影響，如影響單克隆抗體的電荷異構(gòu)體，降低堿峰。

總之，對于細胞生長、抗體產(chǎn)量和質(zhì)量的影響取決于硫酸葡聚糖的分子量、濃度和CHO細胞系的選擇。因此，針對不同CHO細胞系，建議優(yōu)化的硫酸葡聚糖的分子量和濃度，以發(fā)揮硫酸葡聚糖在單克隆抗體生產(chǎn)中的有益作用。[1]

目前也有很多用硫酸葡聚糖鈉鹽,Mw 5,000 ，平均分子量約5 kD，可通過改變細胞表面的電荷，來促使單個細胞懸浮，防止細胞結(jié)團，支持細胞高密度培養(yǎng)，提高細胞活力。

Seebio®提供高品質(zhì)葡聚糖硫酸鈉

產(chǎn)品指標(biāo)及特點

總硫含量	15~20%
硫酸根含量	≤0.2%
熱失重（105℃，2h）	≤10.0%
pH	5.0~7.5
旋光度	+75°~ +105°
鐵離子	≤2.0%
氯離子含量	≤1000ppm
外觀	白色~淡黃色粉末
微生物限度	需氧菌＜10^5 cfu/g
霉菌、酵母菌總數(shù)	＜100cfu/g
內(nèi)毒素	＜5EU/g

1、性能優(yōu)良：純度高，含硫量15~20%；

2、穩(wěn)定性高：聚陰離子復(fù)合物，可溶于水，形成無色溶液，形似天然粘多糖；

3、內(nèi)毒素低：低于5EU/g，對細胞傷害較小。

訂購信息

貨號	產(chǎn)品名稱	級別
DCJ0018D	硫酸葡聚糖5000	細胞培養(yǎng)級
DCJ1606D	硫酸葡聚糖40000	細胞培養(yǎng)級

各類不同用途葡聚糖硫酸鈉（DSS）

葡聚糖硫酸鈉	腸炎模型	分子生物學(xué)	抗病毒	抗凝血劑	抗血脂劑	化妝品研發(fā)
6000-8000			√	√		√
8000（平均）			√	√		√
36000-50000	√		√		√
400000-600000		√	√		√
1400000（平均）		√	√

貨號	產(chǎn)品名稱	平均分子量	包裝
DCJ0083A	硫酸葡聚糖鈉（DSS）	Mw 3,000	100g,500g,5Kg,25Kg
DCJ0018A		Mw 5,000	100g,500g,5Kg,25Kg
1840080		Mw 8,000	100g,500g,5Kg,25Kg
ACJ1516E		Mw 15,000	100g,500g,5Kg,25Kg
DCJ1606A		Mw 40,000	100g,500g,5Kg,25Kg
DCJ0105A		Mw 36,000~50,000	50g,100g
DCJ0016A		Mw 500,000	100g,500g,5Kg,25Kg