肌酸激酶同工酶（CK-MB）-磁微粒化學法學發光（AE/AP） /熒光免疫層析解決方案

來源：作者：人氣：-發表時間：2023-07-11 08:58:00【大中小】

1.項目背景

CK-MB（肌酸激酶MB）是肌酸激酶（CK）的三個異構體（另兩個是CK-BB和CK-MM）之一。CK是一種肌肉代謝的主酶，而這種肌肉代謝促成由三磷酸腺苷（ATP）產生的肌酐磷酸化的可逆反應。CK-MB由兩個亞單位組成（MW=40000每個）：亞單位M表示肌肉，亞單位B表示大腦。

CK-MB同工酶主要存在于心肌中，占CK總活力的20%。在前列腺、脾或骨骼肌有超過5%的CK-MB量，而CK-MB的數量還會隨肌肉類型的功能而變化。當發生急性心肌梗死（AMI）時，CK-MB即出現于血循環中并說明心肌層收到了損傷。CK-MB快速升高達到最高值（12小時內），之后會下降至正常水平（36-72小時）。CK-MB值的這種上升下降的變化形式，伴隨ECG的演變和胸痛的病史，通常被認為是AMI的診斷。CK-MB的測定也有助于溶栓療法下對心肌多次灌注液的效驗而進行的非侵入性評估。同時，CK-MB水平的升高也和骨骼肌損傷有關，但在AMI中并無CK-MB水平的升高和下降。

免疫抑制技術最初用于測定CK-MB活性，并與CK總活力相比（比率CK-MB/CK）。但是，由于抗M抗體不能中和的CK-BB、腺苷酸環化酶（AK）和非典型CK（大CK）的存在，有時會導致CK-MB結果過高。

目前，許多測定CK-MB量（ng/mL）的酶免疫技術都與CK-MB活性測量密切相關，并且不受CK-BB、非典型CK和AK的干擾。

2.性能表現

針對CK-MB的檢測，西寶生物推出2種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下

（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行抗體交叉配對驗證）。

2.1化學發光（AE）平臺：

組合1：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）包被羧基磁珠+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）標記吖啶酯；

線性范圍：0.3ng/mL-300ng/mL；最低檢出限：0.3ng/mL。

組合2：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）包被羧基磁珠+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記吖啶酯；

線性范圍：0.3ng/mL-300ng/mL；最低檢出限：0.3ng/mL。

2.2熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺：

組合3：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記熒光微球+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）劃膜；

線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。

2.3化學發光（AP）平臺：

組合4：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）包被羧基磁珠+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記堿性磷酸酶；

線性范圍：0.3ng/mL-300ng/mL；最低檢出限：0.3ng/mL。

濃度值在5000ng/mL以內沒有發現高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。

2.4 穩定性評估

2.4.1 堿性磷酸酶標記抗體穩定性

A）肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記堿性磷酸酶濃縮液采用AP酶標記物稀釋液（貨號：DCD0519A）稀釋到合適濃度后，進行37℃熱穩定性實驗。如表1所示，CK-MB ALP酶工作液37℃儲存熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值平均降幅超過30%以上，表明CK-MB ALP酶工作液熱穩定性差。

表1 CK-MB ALP酶工作液熱穩定性3天數據（不含保護劑）

序號	CK-MB校準品濃度ng/mL	CK-MB ALP酶工作液37℃儲存熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值均值差異
S0	0	-1.58%
S1	5	-30.68%
S2	25	-28.41%
S3	50	-36.64%
S4	150	-31.84%
S5	350	-35.86%
平均變化（不含S0）		-32.68%

B）在AP酶標記物稀釋液（貨號：DCD0519A）中添加5%左右的蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，繼續進行肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記堿性磷酸酶的37℃熱穩定性實驗。如表2所示，CK-MB ALP酶工作液37℃儲存熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均降幅在10%左右，表明CK-MB ALP酶工作液熱穩定性良好。本實驗表明蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）對CK-MB ALP酶工作液的穩定性有很大幫助。

表2 CK-MB ALP酶工作液熱穩定性7天數據（含保護劑）

序號	CK-MB校準品濃度ng/mL	CK-MB ALP酶工作液（含蛋白保護劑GH）37℃儲存熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
S0	0	2.7%
S1	5	-8.5%
S2	25	-7.0%
S3	50	-10.4%
S4	150	-13.9%
S5	350	-4.8%
平均變化（不含S0）		-8.9%

2.4.2 CK-MB抗原穩定性

A）采用CK-MB抗原稀釋液（貨號：DCD0520A）將CK-MB抗原（貨號：EDD0408B）稀釋成5個梯度（液體型），進行37℃熱穩定性實驗。如表3所示，CK-MB抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值平均降幅超過90%以上，表明CK-MB抗原稀釋梯度（液體型）熱穩定性非常差。

表3 CK-MB抗原稀釋梯度（液體型）熱穩定性3天數據

序號	CK-MB校準品濃度ng/mL	CK-MB 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲存3天發光值均值差異
S0	0	0.3%
S1	5	-89.3%
S2	25	-96.9%
S3	50	-97.9%
S4	150	-98.8%
S5	350	-99.1%
平均變化（不含S0）		-96.4%

B）采用Seebio CK-MB抗原稀釋液（貨號：DCD0520A）將CK-MB抗原（貨號：EDD0408B）稀釋成5個梯度做凍干（凍干型），進行37℃熱穩定性實驗。如表4所示，CK-MB抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均降幅在5%左右，表明CK-MB抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩定性良好。

表4 CK-MB抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩定性7天數據

序號	CK-MB校準品濃度ng/mL	CK-MB 抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值均值差異
S0	0	1.1%
S1	5	-6.5%
S2	25	-2.3%
S3	50	-3.9%
S4	150	-2.8%
S5	350	-2.6%
平均變化（不含S0）		-3.6%

3.臨床相關性

3.1化學發光（AE）平臺：

西寶生物發光（AE）平臺CK-MB抗體配對組合1與羅氏CK-MB試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；

西寶生物發光（AE）平臺CK-MB抗體配對組合2與羅氏CK-MB試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；

3.2熒光免疫層析平臺：

西寶生物熒光平臺CK-MB抗體配對組合3與羅氏CK-MB試劑（電化學發光法）賦值的的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；

3.3化學發光（AP）平臺：

西寶生物發光（AP）平臺CK-MB抗體配對組合4與羅氏CK-MB試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²>0.95，相關性良好；

4.測試方案

4.1化學發光（AE）平臺：

4.1.1抗體配對組合1

待測抗原:CK-MB抗原（貨號：EDD0408B）,樣本/標準品:加樣量20ul；

試劑1：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入預激發液及激發液，進行測試。

4.1.2抗體配對組合2

待測抗原:CK-MB抗原（貨號：EDD0408B）,樣本/標準品:加樣量20ul；

試劑1：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入預激發液及激發液，進行測試。

測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。

4.2熒光免疫層析平臺抗體配對組合3：

待測抗原:CK-MB抗原（貨號：EDD0408B）,樣本/標準品:加樣量10ul；

反應條件：樣本+熒光液混勻，上樣，反應時間（10min-15min）；

測試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。

4.3化學發光（AP）平臺抗體配對組合4

待測抗原:PGII抗原（貨號：）

樣本/校準品:樣品加樣量20ul；

試劑1：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：10ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，進行測試。

測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。

5.產品信息

產品名稱	貨號	推薦配對及其他信息
AP酶標記物稀釋液	DCD0519A	/
蛋白保護劑GH	DCL0009A	推薦使用濃度5%左右
CK-MB抗原稀釋液	DCD0520A	/
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體	EKY0095J	肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）包被羧基磁珠+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）標記吖啶酯（發光配對組合1）肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）包被羧基磁珠+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記吖啶酯（發光配對組合2）肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記熒光微球+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）劃膜（熒光配對組合3）肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）包被羧基磁珠+肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記堿性磷酸酶（發光配對組合4）
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體	EKY0095K
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗原	EDD0408B
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）-羧基磁珠濃縮液	DKY1312A
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）-吖啶酯濃縮液	DKY1312B
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095K）-羧基磁珠濃縮液	DKY1312C
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）-吖啶酯濃縮液	DKY1312D
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）標記熒光微球濃縮液	DKY1312E
肌酸激酶同工酶（CK-MB）抗體（貨號：EKY0095J）-堿性磷酸酶濃縮液	DKY1312F
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
時間分辨熒光微球，羧基（200nm）	AEG0786B