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ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞適用于長時間成像的ER染色試劑

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-08-30 15:55:00【大中小】

ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞

對活細胞影響少，適用于長時間成像的ER染色試劑

本產(chǎn)品是活細胞成像用的不可逆ER染色試劑。與傳統(tǒng)的熒光標記 Glibenclamide系ER染色試劑相比，對細胞功能的藥理作用小，由于其不可逆性，更換培養(yǎng)基后也可進行觀察。

※ 本產(chǎn)品是 funakoshi 基于京都大學工學研究科浜地格教授·田村朋則講師的研究成果商品化的產(chǎn)品。

※ 本產(chǎn)品僅供研究使用。

◆現(xiàn)有 ER 染色試劑的問題點以及 ERseeing 的優(yōu)勢

過去通用的 ER 染色試劑是將熒光染料附著于在ER中特異表達的 K⁺通道拮抗劑 Glibenclamide 上，并廣泛用于 ER 的可視化。然而，由于以下的問題，應用范圍有限。

● 由于 Glibenclamide 的藥理效果，通道活性被抑制，對細胞的影響大。

● 由于是可逆的拮抗劑，因此通過培養(yǎng)基交換等的清洗操作非常容易去除。

與之相對的，ERseeing 是一種新型ER染色試劑，具有與Rhodol綠色熒光染料相連的蛋白標記基團，對 ER 膜成分具有很高的親和力。通過選擇性地集中在 ER 上并用熒光基團標記 ER 蛋白，可以進行不可逆的染色。由于是不可逆的染色，染色后可更換含有 FBS 的培養(yǎng)基，因此可應用于任何的培養(yǎng)基和試劑處理環(huán)境下的長期成像。

	傳統(tǒng)產(chǎn)品（熒光標記 Glibenclamide）	本產(chǎn)品（ERseeing）
原理	在 ER 中發(fā)現(xiàn)的 ATP 敏感性鉀離子通道中的特異性配體 Glibenclamide 用熒光標記后，在與受體結(jié)合時實現(xiàn)可視化。	將蛋白標記基團添加到 Rhodol 綠色熒光染料中，其對 ER 膜成分具有很高的親和力。通過對 ER 上的蛋白質(zhì)進行熒光標記實現(xiàn)可視化。
對細胞的影響	由于 Glibenclamide 的藥理效果會抑制鉀離子通道，影響細胞功能。此外，由于依賴鉀離子通道表達量，有些細胞可能無法染色。	不顯示藥理效果，對細胞功能幾乎沒有影響。
不清洗觀察活細胞	良好	良好
清洗后觀察活細胞	靈敏度低	良好
染色后固定	可以，但是存在部分染色靈敏度低的可能性	良好

◆原著論文

Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.

◆特點

● 激發(fā)/熒光波長：509 nm/524 nm

※ 可利用一般的綠色色素FTIC的觀察條件

● 與傳統(tǒng)的熒光標記 Glibenclamide 系染色試劑相比，可以很好地抑制對細胞的影響。

● 即使培養(yǎng)基中含有 ERseeing 也可以進行觀察。

※ 如果在培養(yǎng)基中長時間染色的話，或許會出現(xiàn)色素呈油滴狀聚集等非特異性染色的情況。若想提高特異性，建議清洗后再觀察。

● 由于是不可逆性染色，染色后可更換培養(yǎng)基。染色后可在含有FBS培養(yǎng)基等的任意培養(yǎng)基中成像。

● 活細胞染色后，也可固定后觀察。還可以與免疫染色法組合使用。

※ 本試劑不適用于固定后細胞的染色。染色請使用活細胞。

◆應用實例

■ ERM的激發(fā)·熒光光譜

激發(fā)光譜（藍）和熒光光譜（綠）

※ 適用于一般綠色熒光色素 FTIC 觀察條件

■ 驗證 ER 特異性

通過與各種細胞器標記共染色評價本試劑的ER特異性。觀察到 ERseeing（100 nM）與現(xiàn)有的 Glibenclamide 系 ER 染色試劑高度共定位（Pearson 相關系數(shù) > 0.9）。另一方面，未觀察到與溶酶體標記和線粒體標記的共定位。高爾基體標記觀察到部分共定位，可能是本試劑標記的蛋白通過高爾基體轉(zhuǎn)運，從 ER 轉(zhuǎn)移至分泌途徑。然而，添加 ER-Golgi 轉(zhuǎn)運抑制劑的話會減少與高爾基體的共定位。（詳情請參考原著論文）

■ 評價細胞內(nèi)滯留性

向無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的HeLa細胞內(nèi)添加 ERseeing 以及傳統(tǒng)的熒光標記 Glibenclamide，染色15 min 后進行觀察（左）。然后，更換含有10%FBS的培養(yǎng)基再次觀察。熒光標記 Glibenclamide 在清洗后熒光信號明顯消失了，但是由于 ERseeing 是不可逆染色的，清洗后也能觀察到很強的熒光信號。使用 ERseeing 進行 ER 染色后，可以在含 FBS 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)并進行各種成像。

※ 本頁面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。