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GenomONE(R) 仙臺病毒包膜細胞融合試劑 - GenomONE(R) -CF EX

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-02-18 09:16:00【大中小】

GenomONE^® 仙臺病毒包膜細胞融合試劑

GenomONE^® -CF EX

GenomONE^®-CF EX 含有仙臺病毒包膜和專用緩沖液，可促使細胞融合。

適用于貼壁/懸浮狀態的所有細胞，僅需 30 min，即可制備融合細胞和雜交瘤。

◆ 用途

● 制備雜交瘤

●　應用于癌細胞與樹狀細胞融合的癌癥免疫研究

●　應用于內臟來源細胞與干細胞融合的再生醫療研究

●　應用于去核未受精卵的核移植等的發育、繁殖和育種研究

●　替代電融合法、PEG 法

◆ HVJ Envelope（HVJ-E）：

HVJ 包膜（HVJ-E）是完全滅活和純化仙臺病毒（HVJ*），即只留下細胞膜融合能力的衣殼蛋白包膜。仙臺病毒的HN蛋白可與細胞膜外的唾液酸受體結合，通過Ｆ蛋白的作用，引起細胞膜融合。在 HVJ-E 中，仙臺病毒的基因組 RNA 已經完全失活，在人類和實驗動物體內不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和設備，它可以安全地在普通的實驗室使用。

*HVJ：日本仙臺病毒

◆ HVJ-E 細胞融合原理

在低溫（0 - 8℃)條件下，每一個細胞與數百個以上的 HVJ - E 接觸，HVJ - E 與細胞膜上的唾液酸受體結合，通過細胞表面吸附（步驟１），細胞通過 HVJ-E 相互連接（步驟２），形成細胞彼此聚集的狀態。當該細胞/HVJ-E 的復合物加熱到 37℃ 時，細胞膜干擾就會進一步擴大，細胞膜內膜結構也暫時改變。這種變化是短暫的，隨后會立即返回到正常結構，但是在這個期間，細胞膜利用強疏水性結合力進行相互融合（步驟３）。

步驟一	步驟二	步驟三

◆ 應用方法

懸浮法	電融合法

◆ 懸浮細胞融合案例

同種細胞融合

異種細胞融合

熒光標記的紅（* 1）細胞和綠色熒光標記（* 2）細胞（每1.0×10⁵個）在融合緩沖液 50 μL 混合后，加入 HVJ-E 冰敷５分鐘，隨后 37℃ 下反應 15 分鐘后，融合細胞（黃色）進行了觀察。

◆ 黏著態和懸浮態細胞融合案例

在粘合狀態BHK-21（紅）和在浮動狀態（綠色）的P19細胞的融合

膠粘狀態的HeLa S3（紅）在浮動狀態（綠色）的P19細胞的融合

熒光標記的（* 1）中的紅，附著的細胞在 12 孔平板，綠色熒光標記（* 2）中，添加預先準備的 HVJ-E，來處理漂浮細胞１×10⁵個的懸浮液（融合緩沖污染），并在室溫下離心（1000轉），每個板５分鐘。隨后孵育37℃15分鐘后，更換增殖用的培養基繼續細胞培養。觀察３個小時后的融合細胞（黃色）。

◆ 和 PEG 法的比較

紅色熒光標志(* 1）的 ratMSC（骨髓由來老鼠間葉系細胞）和綠色熒光標識的老鼠原代培養心肌細胞２×10⁵個融合緩沖液 50 μL 中混合后，添加 HVJ – E，冰浴５分鐘，然后 37℃ 孵育反應15分鐘，觀察融合細胞（黃色）。１-２日培養后，觀察到粘著的融合細胞。在 PEG 法中融合緊接之后細胞毒性強烈，融合細胞的數量很少。

◆安全性說明

HVJ-E 失活的確認（確認無感染性病毒的存在）

1.	細胞增值實驗（熒光灶單元（FFU）法）處理 LLC-MK2 細胞，一到兩天后，病毒生長性的 HVJ 融合蛋白F抗體通過熒光抗體法測定，已證實未檢測到病毒蛋白。<制造階段實驗>
2.	受精卵生長試驗（血凝單位測定）處理受精卵，３天后的病毒增殖，包括在 HVJ 表面的 HN 蛋白的紅血細胞聚合活性（HAU）測量作為指標，已經證實，沒有看到病毒的生長。<制造階段實驗>
3.	小鼠感染性研究鼻腔給藥小鼠和未處理小鼠（SIX周）在相同籠中飼養，通過測定血清中的抗 HVJ 抗體滴度進行了個體之間感染性的檢測。其結果是，在非給藥的情況下未觀察到抗體滴度增加，表明未感染 HVJ-E。
4.	動物個體的遺傳基因導入實驗小鼠、大鼠等實驗動物的各種藥物實驗（肺、氣管、肝和靜脈等）。已證實完全沒有病毒感染或是可疑的事例。

產品編號	產品名稱	產品規格
388-18721	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙臺病毒包膜（1只裝）細胞融合試劑	1 set
384-18723	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙臺病毒包膜（1只裝）細胞融合試劑	4 sets
382-18724	GenomONE ^® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE ^® - CF EX 仙臺病毒包膜（1只裝）細胞融合試劑	16 sets