腺病毒抗原（HAdV）-免疫層析（膠體金及彩色乳膠）解決方案

來源：作者：人氣：-發表時間：2023-12-18 08:54:00【大中小】

1. 項目背景

摘自《兒童腺病毒肺炎診療規范(2019年版)》

人腺病毒(Human adenovirus, HAdV)肺炎(以下簡稱腺病毒肺炎)是兒童社區獲得性肺炎中較為嚴重的類型之一，多發于6個月至5歲兒童，部分患兒臨床表現重，肺外并發癥多，重癥病例易遺留慢性氣道和肺疾病，是目前造成嬰幼兒肺炎死亡和致殘的重要原因之一，需要高度關注。

1.1病原學

HAdV屬于哺乳動物腺病毒屬，為無包膜的雙鏈DNA病毒，1953年由Rowe等首次發現。目前已發現至少90個基因型，分為A～G共7個亞屬，不同型別HAdV的組織嗜性、致病力、流行地區等特性不同。HAdV感染可引起多種疾病，包括肺炎、支氣管炎、膀胱炎、眼結膜炎、胃腸道疾病及腦炎等。與呼吸道感染相關的HAdV主要有B亞屬(HAdV-3、7、11、14、16、21、50、55型)，C亞屬(HAdV-1、2、5、6、57型)和E亞屬(HAdV-4型)。腺病毒肺炎約占社區獲得性肺炎的4%～10%，重癥肺炎以3型及7型多見，HAdV-7B型是2019年我國南方發病地區主要流行株。

1.2流行病學

人腺病毒感染潛伏期一般為2～21 d，平均為3～8 d，潛伏期末至發病急性期傳染性最強。有癥狀的感染者和無癥狀的隱性感染者均為傳染源。傳播途徑包括：(1)飛沫傳播：是呼吸道感染腺病毒的主要傳播方式；(2)接觸傳播：手接觸被腺病毒污染的物體或表面后，未經洗手而觸摸口、鼻或眼睛；(3)糞口傳播：接觸腺病毒感染者的糞便。腺病毒肺炎最常發生于6個月～5歲，尤其是2歲以下兒童。患慢性基礎疾病和免疫功能受損者(如器官移植、HIV感染、原發性免疫缺陷等)更易發生重癥。

1.3實驗室檢查

(1)病毒分離和血清學鑒定：傳統的病毒分離和血清分型方法雖是診斷腺病毒的金標準，但不適于臨床早期診斷。

(2)抗原檢測：針對腺病毒衣殼六鄰體抗原進行檢測，多采用免疫熒光方法，標本為鼻咽抽吸物、鼻咽拭子、痰液及肺泡灌洗液，發病3～5 d內檢出率最高，重癥病例2～3周仍可陽性。

(3)PCR檢測：比傳統的病毒培養和病毒抗原檢測敏感性更高，標本為鼻咽拭子或痰液、支氣管肺泡灌洗液等。實時定量PCR可對病毒進行定量分析，幫助預測病情嚴重程度。

(4)其他方法：宏基因測序在診斷腺病毒感染以及分型方面具有優勢，但價格昂貴，結果需要專業人員判定，不推薦常規開展。該方法主要用于特殊人群，如合并基礎疾病、免疫缺陷病、其他方法檢測陰性或病情危重，以及混合感染需盡早明確病原的患兒，結果判斷必須結合臨床。

本文所述人腺病毒抗原檢測試劑是指利用膠體金免疫層析法或彩色乳膠免疫層析法等基于抗原抗體反應原理，針對嬰幼兒糞便標本中的腺病毒抗原進行體外定性檢測的試劑，輔助醫生診斷。

2.測試方案及性能表現

2.1膠體金免疫層析平臺：

2.1.1抗體配對組合：腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309D）標記膠體金（噴在釋放墊上）+腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309C）劃膜；

2.1.2 腺病毒（ADV）抗原（貨號：EKY0218B）用合適的稀釋液依次稀釋到10ug/mL、5ug/mL、1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL。

2.1.3反應模式：10uL樣品+90uL稀釋液混勻，取80uL混合液上樣，反應時間15min-20min；

2.1.4 實驗結果：在膠體金免疫層析平臺，采用此抗體配對組合測試腺病毒（ADV）抗原稀釋梯度均顯色，測試三例陰性樣品均不顯色，靈敏度可達10ng/mL，表明此抗體配對在膠體金層析平臺測試性能良好。

膠體金層析平臺測試示意圖

2.2彩色乳膠免疫層析平臺：

2.2.1抗體配對組合：腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309C）標記彩色乳膠（噴在釋放墊上）+腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309D）劃膜；

2.2.2 ADV腺病毒抗原（貨號：EKY0218B）用合適的稀釋液依次稀釋到10ug/mL、5ug/mL、1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.2ng/mL。

2.2.3反應模式：10uL樣品+90uL稀釋液混勻，取80uL混合液上樣，反應時間15min-20min；

2.2.4 實驗結果：在彩色乳膠免疫層析平臺，采用此抗體配對組合測試腺病毒（ADV）抗原稀釋梯度均顯色，測試三例陰性樣品均不顯色，靈敏度可達0.2ng/mL，表明此抗體配對在彩色乳膠免疫層析平臺測試性能良好。

彩色乳膠層析平臺測試示意圖

3.產品信息

產品名稱	貨號	推薦配對
腺病毒（ADV）抗體	EKY0309D	腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309D）標記膠體金+腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309C）劃膜（膠體金層析配對組合）腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309C）標記彩色乳膠+腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309D）劃膜（彩色乳膠層析配對組合）
腺病毒（ADV）抗體	EKY0309C
腺病毒（ADV）抗體（貨號：EKY0309D）-膠體金濃縮液	DKY1324A
腺病毒（ADV）抗體（貨號：KY0309C）-彩色乳膠濃縮液	DKY1324B
膠體金（40nm，1OD）	DXJ9917B-100ml
紅色羧基乳膠微球，400nm	DEG0809A-1ml
腺病毒（ADV）抗原	EKY0218B