LabAssay(TM) 游離脂肪酸檢測試劑盒 LabAssay(TM) NEFA

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-09-26 10:40:00【大中小】

LabAssay™ NEFA

LabAssay™ 游離脂肪酸檢測試劑盒

在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游離脂肪酸）與白蛋白結合，被轉運至外周組織，成為外周組織重要的能源來源。游離脂肪酸的濃度通過脂肪組織釋放、外周組織消耗以及肝臟攝取進行調節。

本產品采用了基于酰基輔酶A合成酶（ACS）、酰基輔酶A氧化酶（ACOD）和3-甲基-N-乙基-N-（β-羥乙基）-苯胺（MEHA）的藍紫色顯色酶法。不可用于體外診斷。

◆檢測原理

樣品中的游離脂肪酸（NEFA）在酰基輔酶A（Acyl-CoA）和腺苷- 5'-三磷酸二鈉（ATP）存在下，通過酰基輔酶A合成酶（ACS）的作用，生成酰基輔酶A、AMP以及焦磷酸（PPi）。生成的酰基輔酶A在酰基輔酶A氧化酶（ACOD）的作用下被氧化，同時生成2,3-反式烯酰輔酶A（2,3-trans-Enoyl-CoA）和過氧化氫。生成的過氧化氫在過氧化物酶（POD）的作用下，與3-甲基-N-乙基-N-（β-羥乙基）-苯胺（MEHA）和4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrine）進行定量氧化縮合，生成藍紫色色素。通過測定這種藍紫色的吸光度，即可計算樣品中的NEFA濃度。

◆性能

●　標準曲線范圍：0.4～1.97 mEq/L

●　檢測時間：約 20 min

●　樣品：血清、血漿（小鼠、大鼠、人、犬、貓）

●　所需樣品量：4 μL

●　測定波長：550 nm

◆試劑盒組成

１．顯色劑A——10 mL用×4瓶

２．顯色劑A溶解液——45 mL×1瓶

３．顯色劑B——20 mL用×4瓶

４．顯色劑B溶解液——90 mL×1瓶

５．標準溶液（油酸1 mEq/L）——7 mL×1瓶

※ 油酸1 mEq/L=1 mmol

◆標準曲線示例

◆檢測操作方法

微孔板法

按下表條件進行反應。

No.	標準溶液	蒸餾水或去離子水	樣品量	濃度
1	80 µL	120 µL	4 μL	0.40 mEq/L
2	120 µL	80 µL	4 μL	0.60 mEq/L
3	160 µL	40 µL	4 μL	0.80 mEq/L
4	未經稀釋	-	4 μL	1.00 mEq/L
5	未經稀釋	-	8 μL	1.97 mEq/L*1

*1：樣品量通常是4 μL, 但在這里使用了8 μL。NEFA的濃度需要根據上表校正。

	Test	標準	空白對照	樣品盲檢＊２
顯色試劑 A	80 μL	80 μL	80 μL	80 μL
待測物	血清 4 μL	標準溶液 4 μL	蒸餾水或去離子水 4 µL	―
充分混合＊3、37 ℃加熱10 min。
顯色試劑 B	160 μL	160 μL	160 μL	160 μL
待測物	―	―	―	血清 4 μL
充分混合＊3、37 ℃加熱10 min。
恢復至室溫，在30 min內以空白作為對照，測定樣品和標準溶液的吸光度。
550 nm 吸光過濾

*2：普通的樣品無需樣品盲檢。請使用乳糜血清或溶血血清進行測試。

*3：使用板式攪拌機，在600~1000 rpm下攪拌1 min左右。

◆加標回收測試

NEFA的加標回收測試，將已知含量的標準品加標到人、小鼠、大鼠樣品中，n=2。

人樣品

人樣品	添加量（mEq/L）	測定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
血清樣品	-	0.69
	0.4	1.14	0.45	111.80%
	0.61	1.34	0.64	105.70%
	0.78	1.54	0.85	108.50%
	1.01	1.73	1.03	102.30%
血漿（EDTA）樣品	-	0.28
	0.4	0.7	0.43	105.30%
	0.61	0.9	0.62	102.50%
	0.78	1.12	0.84	106.80%
	1.01	1.34	1.06	105.40%

小鼠樣品

小鼠樣品	添加量（mEq/L）	測定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
血清樣品	-	0.7
	0.4	1.07	0.37	91.70%
	0.61	1.31	0.61	100.10%
	0.78	1.44	0.74	94.50%
	1.01	1.62	0.92	91.30%
血漿（EDTA）樣品	-	0.62
	0.4	0.99	0.37	92.50%
	0.61	1.29	0.68	111.50%
	0.78	1.38	0.77	97.80%
	1.01	1.62	1	99.10%

大鼠樣品

大鼠樣品	添加量（mEq/L）	測定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
大鼠血清樣品	-	0.57
	0.4	1	0.43	106.40%
	0.61	1.21	0.65	106.20%
	0.78	1.4	0.83	106.40%
	1.01	1.57	1.01	99.70%
大鼠血漿（EDTA）樣品	-	0.41
	0.4	0.86	0.45	111.50%
	0.61	1.07	0.66	108.50%
	0.78	1.27	0.86	109.50%
	1.01	1.44	1.02	101.40%

培養基樣品

樣品	添加量（mEq/L）	測定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
50%培養基 +標準品	-	0.03	-	-
	0.374	0.409	0.38	101.60%
	0.683	0.71	0.68	99.60%
	0.829	0.812	0.782	94.40%
	1.013	1.059	1.03	101.70%

◆樣品檢測示例

人血清樣品

	測定值（mEq/L）		mean	SD	CV（%）
混合人血清，男性	0.686	0.688	0.687	0.001	0.2
混合人血漿（K2EDTA），男性	0.354	0.35	※0.352	0.003	0.8

※參考值

20%稀釋CD-1（ICR）雄性小鼠正常血清

序號	測定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	1.119	1.117	1.118	0.001	0.1
2	0.783	0.793	0.788	0.007	0.9
3	0.7	0.731	0.715	0.022	3.1
4	0.795	0.792	0.794	0.002	0.2
5	0.825	0.833	0.829	0.005	0.6

100%CD-1(ICR)雄性小鼠正常血漿（K2EDTA）

序號	測定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	0.311	0.308	※0.309	0.002	0.6
2	0.319	0.321	※0.320	0.002	0.6
3	0.202	0.208	※0.205	0.004	2
4	0.173	0.185	※0.179	0.008	4.6
5	0.293	0.318	※0.305	0.017	5.6

※參考值

10％稀釋雄性Sprague Dawley大鼠正常血清

序號	測定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	0.3	0.3	※0.300	0	0
2	0.373	0.368	※0.371	0.004	1.1
3	0.301	0.277	※0.289	0.017	5.8
4	0.365	0.364	※0.365	0	0.1
5	0.403	0.362	※0.382	0.029	7.6

※參考值

100%雄性比格犬正常血清

序號	測定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年齡
1	0.654	0.657	0.656	0.0027	0.4	4
2	0.642	0.688	0.665	0.032	4.8	6
3	0.419	0.431	0.425	0.009	2	6
4	0.377	0.383	※0.38	0.0057	1.5	11
5	0.887	0.877	0.882	0.007	0.8	12
6	0.604	0.595	0.599	0.006	1.1	6
7	0.987	1.025	1.006	0.0267	2.7	10
8	0.501	0.51	0.506	0.006	1.2	4

※參考值

100%雄性比格犬正常血漿（EDTA）

序號	測定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年齡
1	0.44	0.444	0.442	0.0033	0.7	4
2	0.419	0.435	0.427	0.011	2.6	6
3	0.311	0.306	※0.308	0.0037	1.2	10
4	0.47	0.487	0.478	0.0123	2.6	12
5	0.472	0.475	0.473	0.005	1	6
6	0.37	0.364	※0.367	0.0047	1.2	11
7	0.789	0.77	0.78	0.0133	1.7	10
8	0.439	0.384	0.411	0.0387	9.4	12

※參考值

100% 雄性短毛貓正常血清

序號	測定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年齡
1	0.709	0.726	0.717	0.0117	1.6	3
2	0.628	0.642	0.635	0.01	1.6	3
3	1.004	1.003	1.004	0.0053	0.5	6
4	0.974	0.987	0.981	0.0093	0.9	4
5	0.624	0.649	0.636	0.017	2.7	6
6	1.175	1.212	1.193	0.0267	2.3	6
7	1.086	0.959	1.022	0.0893	8.8	1
8	0.371	0.393	※0.382	0.0157	4.1	1

※參考值

100％雄性短毛貓正常血漿（EDTA）

序號	測定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年齡
1	1.092	1.107	1.099	0.0103	0.9	0.5
2	0.177	0.172	※0.174	0.0033	2	1
3	0.243	0.24	※0.241	0.0043	1.7	3
4	0.32	0.319	※0.320	0.0067	2.2	0.5
5	0.363	0.354	※0.359	0.006	1.7	3
6	0.206	0.189	※0.197	0.012	6.2	3
7	0.232	0.199	※0.215	0.024	11.1	0.5
8	0.142	0.12	※0.131	0.016	12.3	1