溶酶體細胞毒理檢測試劑盒

來源：作者：人氣：-發表時間：2023-10-08 09:52:00【大中小】

溶酶體細胞毒理檢測試劑盒

Lyso-ID® Red cytotoxicity kit

◆原理

Lyso-ID^® Red cytotoxicity kit 陽離子兩親性示蹤劑（CAT）的染料，其以類似誘導磷脂藥物的方式迅速分到細胞中。通過在探頭（染料）上放置可滴定基團，形成此示蹤。使標記物擴展到用弱堿性細胞穿透物化合物預處理的細胞層狀包涵體，如抗瘧藥氯喹。此外，溶酶體本身探頭可用于突出溶酶體樣細胞器，前提是其中的細胞產生包含大多數降解酶的溶酶體，非酸性母體細胞器的空泡可以監測溶酶體降解功能的失常，使用藥物類的陽離子示蹤染料選擇性地快速染色酸性細胞器，可用于監控活細胞內溶酶體的積聚和溶酶體樣結構。可用于體外毒理學和臨床前藥物安全評估。

◆優點·特色

●　包括迅速區分細胞和標記酸性細胞器的獨特藥物類染料的分析。

●　市面上少有可用于長期監測細胞毒性作用的商業化產品。

●　高通量快速檢測：染料僅需10-15分鐘孵育。

●　無需與人工磷脂類似物共同培育進行檢測，消除了混雜染料所造成偽像的可能性。

●　監控溶酶體積累長期藥物治療的反應。

●　定量分析，包括藥物誘導，3個小時即可完成

◆試劑盒組成

10×雙色檢測試劑：2×1 mL
檢測緩沖液：20 mL

Verapamil 對照：3 μmoles
10×分析緩沖液：15 mL

◆案例·應用

1、消除混雜染料所造成偽像

在短短15分鐘，LYSO-ID^® 紅染料培養消除了混雜染料所造成偽像的可能性。在24小時內U-2 OS細胞的熒光強度對應不同濃度氯喹。在藥物治療期間，把用LipidTox染料（綠線）染色的細胞放在熒光脂質中培育24小時。在藥物培育后，用LYSO-ID^® Red dye（red line）或Hoechst公司產品33342（藍線）染色細胞15分鐘。

2、激發和發射光譜

A是LYSO-ID^® Red Detection Reagent；B是Hoechst 33342細胞核染色。

3、溶酶體擾動活性治療學的高通量篩選

使用傳統的熒光酶標儀去估測在U-2 OS細胞里維拉帕米的毒性。用維拉帕米處理U-2 OS的細胞18小時后，用LYSO-ID^® Red dye染色15分鐘。高Z因子（0.87為100 μM的維拉帕米）顯示LYSO-ID^® Red dye適合HTS的應用。Hoechst可用作復染劑，歸一化控制細胞數目。

4、細胞的復合亮場和熒光顯微鏡圖像

U2-OS細胞（左），用64 μM氯喹預先處理5小時的細胞（右）。用LYSO-ID^® Red dye來染色細胞10分鐘。用Hoechst 33342 染料進行細胞核復染。

5、使用LYSO-ID^® Red dye來估測U-2 OS細胞藥物誘導的溶酶體的累積

這兩種化合物是陽離子和兩親性，并且可觀察到誘導溶酶體內磷脂異常累積，導致板層體的形成。由圖中增加的紅色熒光可知，U-2 OS細胞對磷脂誘導藥物的處理，導致溶酶體數目和體積的增加。細胞核的復染用Hoechst 33342染料（藍色）。

（A）未處理的細胞（B）氯丙嗪，28µM （C）維拉帕米，200 µM

產品編號	產品名稱	產品規格
ENZ-51015-KP002	Lyso-ID^® Red cytotoxicity kit (GFP-Certified^®) for microplates 溶酶體細胞毒理檢測試劑盒（紅色熒光）（綠色細胞系）（微孔板）	1 kit