用于檢測細胞內多胺的熒光試劑PolyamineRED

來源：作者：人氣：-發表時間：2023-10-12 10:00:00【大中小】

用于檢測細胞內多胺的熒光試劑PolyamineRED

PolyamineRED是一種與多胺特異性反應，并向多胺添加紅色熒光色素TAMRA的試劑。不與單胺或氨基酸反應。由于本產品可用于活細胞，因此能夠簡單地檢測出細胞內多胺并進行半定量。

※本產品基于國立研究開發法人理化學研究所開拓研究本部田中生體機能合成化學研究室的研究成果商品化。

※本產品僅供科研使用。不可應用于臨床。

PolyamineRED擁有細胞膜透過性，在細胞內與多胺發生反應并將TAMRA偶聯至多胺。由于TAMRA與多胺結合后會失去膜透過性，所以可以通過清洗去除未反應的PolyamineRED，因此可選擇性實現細胞內多胺的可視化。已知多胺會在癌細胞中過量產生，所以使用PolyamineRED可以檢測出癌細胞中重要的多胺信號。詳情請參考應用實例。

◆多胺是什么

多胺是含有兩個或以上氨基的直鏈烷基胺的總稱。已從生物體中鑒定出各種結構的多胺，主要為腐胺（putrescine），亞精胺（Spermidine）和精胺（Spermine）。以亞mM~mM的高濃度存在于哺乳動物、微生物、植物的細胞中。

據報導，它在生理pH下顯示聚陽離子性，并通過與DNA / RNA和蛋白的相互作用呈現出各種生理活性。由于癌細胞中多胺合成基因ornithine decarboxylase (ODC)的過表達會引起多胺的過量產生，因此多胺有望成為癌癥標記物。但是，由于多胺的結構簡單因而難以分析，限通過HPLC的低通量分析。

另外，分析多胺必須在細胞破裂后進行去除蛋白和其他小分子的前處理，所以可能會因前處理產生偏差。因此，無需前處理便可在活細胞內定量多胺的方法備受期待。

PolyamineRED為理化學研究所田中主任研究員等所開發的新型多胺檢測試劑，是一款特異性標記細胞內多胺的TAMRA并使其可視化的多胺檢測試劑。

多胺在生物體內合成的路徑

◆特點

●　PolyamineRED是一款利用甘氨酸炔丙基酯與多胺特異性且快速反應的試劑。可通過在多胺標記TAMRA使細胞內多胺可視化。

●　可用羅丹明濾光片組觀察（激發/發射波長：560 nm/585 nm）。

●　對多胺（腐胺，亞精胺，精胺）顯示高特異性，幾乎不與氨基酸或單胺反應。

●　擁有細胞膜透過性，可用于活細胞的多胺檢測。可通過清洗去除未反應試劑，而多胺-TAMRA復合物因多胺的聚陽離子性保留在細胞內。

●　無需前處理，僅需簡單地操作即可檢測細胞內多胺。

●　可通過細胞內熒光強度半定量多胺總量。*

●　可觀察細胞內多胺的分布情況。

* 由于可檢測出多胺總量，所以不能定量單個多胺種類。

◆應用

●　細胞內多胺的半定量

●　評價多胺在細胞內的分布情況

◆原著論文

K. Vong, K. Tsubokura, Y. Nakao, T. Tanei, S. Noguchi, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, Chem. Commun., 53, 8403～8406 (2017)."Cancer cell targeting driven by selective polyamine reactivity with glycine propargyl esters."

◆操作方法概要

1. 添加終濃度10~30 μM的PolyamineRED至新制備的培養基中。

2. 去除培養細胞的培養基，使用PBS清洗兩遍。

3. 添加含有PolyamineRED的培養基。

4. 培養10 min以上。

5. 使用PBS清洗細胞三遍。

6. 甲醛固定后，進行任意染色并觀察。

※甲醇固定可能會導致多胺成分泄漏出細胞外，因此不建議使用甲醇固定。

◆應用實例

癌細胞與非癌細胞的多胺檢測

使用30 μM的PolyamineRED處理3種癌細胞（MCF7，MDA-MB-231，SK-BR-3）與2種非癌細胞（MCF10A，淋巴球）10 min，使用PBS清洗三遍，在DAPI染色后用福爾馬林固定細胞。在癌細胞中觀察到了TAMRA信號。另一方面，由于非癌細胞中的多胺數量較少，因此在MCF10與淋巴球中幾乎檢測不出TAMRA信號。

多胺在細胞內的分布

使用30 μM的PolyamineRED處理MDA-MB-231 10 min后進行DAPI染色并固定細胞。在MDA-MB-231中，細胞核內檢測出的多胺比細胞質多。使用PolyamineRED，可以評價細胞內多胺的分布情況。

參考：甘氨酸炔丙基酯的多胺特異性

使用HPLC追溯甘氨酸炔丙基酯的模型分子（Benzyloxycarbonyl glycine propagyl ester）與多胺（腐胺，亞精胺，精胺），氨基酸以及單胺的反應。

僅與多胺（精胺，亞精胺，腐胺）發生反應，而對單胺（腎上腺素）和氨基酸（賴氨酸）幾乎不反應。由此可知，氨基數越多，對多胺的反應性越高。（引用：原著論文）

物質名稱	反應率%
精胺	82%
亞精胺	78%
腐胺	66%
腎上腺素	＜1%
賴氨酸	2%

※ 本頁面產品僅供研究用，研究以外不可使用。

產品編號	產品名稱	產品規格
FDV-0020	PolyamineRED (Intracellular Polyamine Detection Reagent) PolyamineRED（細胞內多胺檢測試劑）	0.5 mg