殘留DNA提取&檢測系列

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-01-08 09:02:00【大中小】

殘留DNA提取&檢測系列

在生物制藥的生產過程中，宿主細胞攜帶的殘留DNA可能會帶來致癌性、傳染性和免疫調控風險。

因此需要對生產過程來源的雜質進行管理。世界衛生組織（WHO）、美國食品藥品監督管理局（FDA）和歐洲藥典（EP）為最終的宿主來源殘留DNA含量限制提供了指南標準，即應當少于10 ng/劑或100 pg/劑。

針對提取/純化殘留DNA，FUJIFILM Wako可提供符合中國藥典標準的的殘留DNA提取試劑盒（碘化鈉法）；此外，針對殘留DNA定量檢測，FUJIFILM Wako可提供定量檢測CHO細胞殘留DNA的qPCR試劑盒——QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for CHO cells。

QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for CHO cells

QCdetect™ 殘留DNA檢測試劑盒，CHO細胞用

本試劑盒可通過qPCR法（探針法）定量CHO細胞來源基因組DNA。

適用于抗體藥及其生產工藝中殘留DNA的檢測。

●　高靈敏檢測：≥0.0003 pg

●　高線性的標準曲線

●　誤差小，再現性高

●　使用預混合緩沖液，操作簡單

●　不易受樣品所含雜質的影響

●　含Internal Control（內標）

◆標準曲線示例

使用本產品對0.0003 pg~30,000 pg范圍內的CHO gDNA進行qPCR檢測，并制備標準曲線（n=3）。

在0.0003 pg~30,000 pg 這一廣泛的濃度范圍內，也能獲得高線性的標準曲線。

pg/well	0.0003	0.003	0.03	0.3	3	30	300	3000	30000
Ct	37.639	34.822	31.546	28.117	24.809	21.337	18.079	14.726	11.506
	37.107	34.981	31.506	28.324	24.906	21.416	18.084	14.744	11.467
	37.642	34.689	31.595	28.267	24.987	21.533	18.225	14.807	11.269
Average Ct	37.462	34.83	31.549	28.236	24.901	21.428	18.129	14.759	11.414
S.E	0.30806	0.14652	0.04455	0.10713	0.08904	0.09853	0.0831	0.0424	0.12685

◆DNA片段的檢測

為了測試本產品能否檢測CHO gDNA，超聲處理CHO gDNA使其片段化，并使用本試劑盒進行檢測。

能以與完整gDNA相同的靈敏度來檢測片段化的gDNA。此外，在低濃度的gDNA下也并未觀察到檢測靈敏度的下降。

◆含高濃度蛋白樣品的應用示例 —配合使用DNA Extractor^® Kit —

向含有高濃度γ-球蛋白的樣品中添加CHO gDNA，使用DNA Extractor^® Kit提取DNA。之后，使用本產品定量所得DNA，計算加標回收率。

? 樣品組成

● 20 mg/mL γ-球蛋白

● 3%甘露醇

● 2%蔗糖

● 10 mM L-精氨酸

● 0.01% Tween20

?添加的CHO gDNA濃度

10 ng/mL

1 ng/mL

100 pg/mL

結果表明，對于含有高濃度蛋白的樣品，CHO gDNA也能獲得高回收率。

◆試劑盒組成

● 1×PCR Master Mix 2×1 mL

● DNA Dilution Buffer (DDB) 1×10 mL

● CHO Control DNA 1×40 μL

◆檢測波長

● CHO gDNA（如FAM）

● Internal Control（如HEX/VIC等）

Internal Control為非天然的合成DNA。

殘留DNA提取試劑盒（碘化鈉法）

碘化鈉法提取宿主細胞來源殘留DNA的試劑盒。可通過qPCR對所提取的DNA進行定量。適用于CHO細胞、大腸桿菌、酵母等宿主細胞來源DNA含量的檢測和管理。

●　高回收率，回收痕量DNA（100-1,000 fg）

●　全程單管操作，無需換管

●　提取全程僅需60-90 min

●　提供含高濃度蛋白樣品用的流程

● 　遵照中國藥典收錄碘化鈉法^*1

*1 為使DNA檢測方法與國際標準保持同步，中國藥典（The Chinese Pharmacopoeia）宣布建立殘留細胞DNA檢測國家標準。碘化鈉法作為殘留DNA提取方法，新增至2020版的中國藥典。

※ 本頁面產品僅供研究用，研究以外不可使用。

產品編號	產品名稱	產品規格
294-85201	QCdetect™ Residual DNA Detection Kit for CHO cells QC detect™ 殘留DNA檢測試劑盒，CHO細胞用	100 tests
292-81101	DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method) 殘留DNA提取試劑盒（碘化鈉法）	50 tests