總及游離三碘甲狀腺原氨酸（TT3及FT3）-磁微粒化學發光法（AE/AP）/熒光免疫層析解決方案（雙抗體夾心法）

來源：作者：人氣：-發表時間：2025-01-22 13:31:00【大中小】

1.項目背景

1.1臨床意義

摘自《總三碘甲狀腺原氨酸檢測試劑注冊技術審查指導原則》

三碘甲狀腺原氨酸（3,5,3’-L-三碘甲狀腺原氨酸，T3）是由甲狀腺合成和分泌（占大約20%）或由甲狀腺素在5’位脫碘轉化而來（占大約80%）的一種激素，分子量為651Da，是目前已知生物活性最強的甲狀腺激素，其生物活性為甲狀腺素（T4）的3～5倍。在血液循環中，99.7%的T3與結合蛋白結合，發揮生理活性的是游離的T3（FT3）。游離T3檢測對疾病診斷的靈敏度和特異性較好，但相對總T3而言更容易受到一些疾病和藥物的干擾導致結果假性偏高或偏低，此時總T3檢測結果更能準確反映體內三碘甲狀腺原氨酸的狀態。總三碘甲狀腺原氨酸（TT3）是指血清或血漿中游離態和結合態三碘甲狀腺原氨酸的總和，在臨床上主要用于輔助診斷甲狀腺功能亢進癥（簡稱甲亢）、甲狀腺功能減低癥（簡稱甲減）及其臨床療效的評價等。

TT3在正常和病理狀態下的水平特點，不同類型疾病、不同人群（例如年齡、性別、妊娠情況等）的TT3水平差異。詳細說明測定TT3水平對相關疾病的臨床指導意義。

TT3升高見于：

①甲亢，包括原發性/繼發性甲亢、T3型甲亢；

②亞急性甲狀腺炎和無痛性甲狀腺炎；

③促甲狀腺激素（TSH）不適當分泌綜合征。

TT3降低見于：

①甲減；

②甲狀腺切除術后；

③應用雄激素、糖皮質激素、生長激素等藥物引起TBG降低。

FT3的檢測理論上不受結合蛋白濃度和結合力特性的影響，因此不需要額外進行反映結合參數類項目的檢測(如T-uptake，TBG)。因此，FT3的測定是臨床常規評估甲狀腺功能的重要指標。FT3的測量結果可作為甲狀腺疾病鑒別診斷的依據，被用來區分不同類型的甲亢，以及確診T3甲狀腺毒癥。

1.2小分子雙抗體夾心法

2024年公開專利CN117871874A《小分子物質免疫檢測方法》對小分子夾心法的反應原理做了詳細闡述，摘抄部分內容如下。

本發明提出了一種小分子物質免疫檢測方法，其特征在于，包括：（1）將含有小分子物質的樣本、配體、第二抗體和表面活性劑進行反應，得到小分子物質-配體-第二抗體三元復合物，且所述小分子物質-配體-第二抗體三元復合物中小分子物質誘導配體形成至少一個新的構象表位，所述第二抗體可特異性結合所述至少一個新的構象表位，所述表面活性劑可消除所述第二抗體與構象未改變的配體之間的結合；（2）檢測所述小分子物質-配體-第二抗體三元復合物。

樣本中的小分子物質與配體發生特異性結合，得到小分子物質-配體復合物，并且小分子物質-配體復合物中小分子物質誘導配體形成至少一個新的構象表位。小分子物質-配體復合物與第二抗體和表面活性劑反應，第二抗體特異性地與形成新構象表位的配體結合，同時也會與構象未改變的配體產生弱結合。表面活性劑可消除第二抗體與構象未改變的配體之間的結合，得到小分子物質-配體-第二抗體三元復合物。通過檢測三元復合物，可以實現小分子物質檢測。由此，采用雙抗體夾心法可以提高檢測準確性和靈敏度，不同濃度梯度樣本檢測區分度高。同時，減少了篩選高特異性復合物抗體的難度，更有利于小分子物質檢測試劑盒的大規模生產和檢測，應用價值高。

2. 性能表現

針對TT3/FT3的檢測（夾心法），西寶生物推出3種抗體及2種解離劑。

具體性能如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行更為詳細的驗證）。

2.1化學發光（AE）平臺

組合1（TT3）：T3抗體（貨號：EKY0323G）包被羧基磁珠+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記吖啶酯+TT3解離劑（發光專用）（貨號：DCH0208A）；

線性范圍：0.195ng/mL-6.51ng/mL；最低檢出限：0.195ng/mL。

組合1（FT3）：T3抗體（貨號：EKY0323F）包被羧基磁珠+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記吖啶酯；

線性范圍：0.26pg/mL-32.55pg/mL；最低檢出限：0.26pg/mL。

2.2化學發光（AP）平臺

組合2（TT3）：T3抗體（貨號：EKY0323G）包被羧基磁珠+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記堿性磷酸酶+TT3解離劑（發光專用）（貨號：DCH0208A）；

線性范圍：0.195ng/mL-6.51ng/mL；最低檢出限：0.195ng/mL。

組合2（FT3）：T3抗體（貨號：EKY0323F）包被羧基磁珠+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記堿性磷酸酶；

線性范圍：0.26pg/mL-32.55pg/mL；最低檢出限：0.26pg/mL。

2.3熒光免疫層析平臺

組合3（TT3）：T3抗體（貨號：EKY0323G）標記熒光微球+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）劃膜+TT3解離劑（層析專用）（貨號：DCH0208B）；

線性范圍：0.50ng/mL-6.51ng/mL；最低檢出限：0.50ng/mL。

組合3（FT3）：T3抗體（貨號：EKY0323G）標記熒光微球+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）劃膜；

線性范圍：1pg/mL-32.55pg/mL；最低檢出限：1pg/mL。

3.臨床相關性

3.1化學發光（AE）平臺：

3.1.1 西寶生物發光（AE）平臺TT3抗體配對組合1與羅氏診斷的TT3試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²＞0.90，相關性較好；

3.1.2西寶生物發光（AE）平臺FT3抗體配對組合1與羅氏診斷的FT3試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²＞0.95左右，相關性良好。

3.2化學發光（AP）平臺：

3.2.1西寶生物發光（AP）平臺TT3抗體配對組合2與羅氏診斷的TT3試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²＞0.90左右，相關性較好；

3.2.2西寶生物發光（AP）平臺FT3抗體配對組合2與羅氏診斷的FT3試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²＞0.95，相關性良好。

3.3熒光免疫層析平臺：

3.3.1 西寶生物熒光免疫層析平臺TT3抗體配對組合3與羅氏診斷的TT3試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²＞0.95，相關性良好。

3.3.2 西寶生物熒光免疫層析平臺FT3抗體配對組合3與羅氏診斷的FT3試劑（電化學發光法）賦值的臨床樣本相關性R²＞0.95，相關性良好。

4. 測試方案

4.1化學發光（AE）平臺

4.1.1 TT3抗體配對組合1

樣本:樣品加樣量20ul；

試劑1：T3抗體（貨號：EKY0323G）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

試劑3：TT3解離劑（發光專用）（貨號：DCH0208A）。

反應條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑3，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入50ul 試劑2，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。

4.1.2 FT3抗體配對組合1

樣本:樣品加樣量20ul；

試劑1：T3抗體（貨號：EKY0323F）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入20ul 試劑2，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。

測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。

4.2化學發光（AP）平臺

4.2.1 TT3抗體配對組合2：

樣本:樣品加樣量10ul；

試劑1：T3抗體（貨號：EKY0323G）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：T3單復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

試劑3：TT3解離劑（發光專用）（貨號：DCH0208A）。

反應條件：

第一步：10ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑3混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入50ul 試劑2，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入底物，進行測試。

4.2.2 FT3抗體配對組合2：

樣本:樣品加樣量20ul；

試劑1：T3抗體（貨號：EKY0323F）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

試劑3：TT3解離劑（發光專用）（貨號：DCH0208A）。

反應條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，進行測試。

測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。

4.3熒光免疫層析平臺

4.3.1 TT3抗體配對組合3

反應條件：10ul樣品+100ul TT3解離劑（層析專用）（貨號：DCH0208B）混勻（無需等待解離），上樣，反應時間（10min-15min）；

4.3.2 FT3抗體配對組合3

反應條件：10ul樣品+100ul 稀釋液混勻，上樣，反應時間（10min-15min）；

測試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。

5.產品信息

產品名稱	貨號	推薦配對
三碘甲狀腺原氨酸（T3）抗體	EKY0323F	TT3配對： T3抗體（貨號：EKY0323G）包被羧基磁珠+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記吖啶酯+TT3解離劑（發光專用）（貨號：（貨號：DCH0208A））（發光配對組合1） T3抗體（貨號：EKY0323G）包被羧基磁珠+T3單抗3（貨號：EKY0323H）標記堿性磷酸酶+TT3解離劑（發光專用）貨號：DCH0208A）（發光配對組合2） T3抗體（貨號：EKY0323G）標記熒光微球+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）劃膜+TT3解離劑（層析專用）（熒光配對組合3） FT3配對： T3抗體（貨號：EKY0323F）包被羧基磁珠+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記吖啶酯（發光配對組合1） T3抗體（貨號：EKY0323F）包被羧基磁珠+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記堿性磷酸酶（發光配對組合2） T3抗體（貨號：EKY0323G）標記熒光微球+T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）劃膜（熒光配對組合3）
三碘甲狀腺原氨酸（T3）抗體	EKY0323G
三碘甲狀腺原氨酸（T3）復合物抗體	EKY0323H
三碘甲狀腺原氨酸（T3）校準質控物	DBY0185D
T3抗體（貨號：EKY0323F）包被羧基磁珠濃縮液	DKY1337A
T3抗體（貨號：EKY0323G）包被羧基磁珠濃縮液	DKY1337B
T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）吖啶酯濃縮液	DKY1337C
T3復合物抗體（貨號：EKY0323H）標記堿性磷酸酶濃縮液	DKY1337D
T3抗體（貨號：EKY0323G）標記熒光微球濃縮液	DKY1337E
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
時間分辨熒光微球，羧基（200nm）	AEG0786B
TT3解離劑（發光專用）	DCH0208A
TT3解離劑（層析專用）	DCH0208B
牛血清白蛋白(無蛋白酶,低脂肪酸,低lgG,內毒素)	DCL0001T	磁珠濃縮液、吖啶酯濃縮液、堿性磷酸酶濃縮液的稀釋液中及包被及標記種封閉劑含有此款BSA可有效降低背景信號值及提高信噪比。建議使用濃度1%-2%。
酶解深水魚皮明膠	ACH0085J	樣品墊、釋放墊、標記過程中封閉劑或穩定劑。建議使用濃度1%-10%。
蛋白保護劑GH	DCL0009A	推薦使用濃度20%左右。