抗體稀釋緩沖液選擇及應(yīng)用

來源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2024-11-21 14:20:00【大中小】

抗體稀釋緩沖液是一種用于稀釋抗體的溶液，通常在免疫實(shí)驗(yàn)中使用，如Western Blot、免疫熒光（IF）、免疫組化（IHC）等。抗體稀釋緩沖液的主要作用是防止抗體效價(jià)下降，減少非特異性吸附，并提高實(shí)驗(yàn)的特異性和靈敏度。

抗體稀釋緩沖液的配方和成分根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求有所不同。一些緩沖液中會(huì)添加牛血清白蛋白（BSA）作為穩(wěn)定劑，以防止抗體在稀釋過程中失活。此外，某些緩沖液還可能包含防腐劑如疊氮鈉，以延長稀釋液的保存時(shí)間。

主要作用

維持抗體穩(wěn)定性：提供一個(gè)適宜的pH值和離子強(qiáng)度環(huán)境，防止抗體變性或失活。

降低非特異性結(jié)合：減少抗體與非目標(biāo)蛋白或基質(zhì)的結(jié)合，提高實(shí)驗(yàn)的特異性。

優(yōu)化抗體與抗原的結(jié)合：通過調(diào)節(jié)緩沖液的成分，可以影響抗原-抗體反應(yīng)的效率。

抗體稀釋液產(chǎn)品	說明	應(yīng)用
抗體稀釋液（普通型）	抗體稀釋液（普通型）（Antibody Dilution Buffer）用于普通抗體的稀釋，可防止抗體效價(jià)下降，減少抗體非特異性吸附。稀釋后的抗體在4℃可以短期保存，抗體的效價(jià)會(huì)隨時(shí)間而下降。	按照適當(dāng)比例稀釋抗體，例如 1:1000，即將1μl抗體加入到1ml稀釋液中。抗體稀釋后可直接用于實(shí)驗(yàn)，在一次孵育結(jié)束后，可以回收稀釋的抗體，4℃短期保存，以用于下次的實(shí)驗(yàn)，但抗體的效價(jià)會(huì)隨時(shí)間而降低。
封閉用抗體稀釋液	抗體稀釋液中添加了抗體保護(hù)劑，可以保持抗體的活性和穩(wěn)定性，減少特異性結(jié)合，降低非特異性的背景著色，提高實(shí)驗(yàn)的特異性和靈敏度。主要成分由Tris-HCl緩沖液、牛血清白蛋白、疊氮鈉組成。	封閉
通用型免疫測定抗體稀釋液	抗體稀釋液用在所有免疫測定中稀釋抗體。不含免疫球蛋白BSA，不含磷酸鹽、疊氮化鈉或汞防腐劑。可用于稀釋所有抗體，包括過氧化物酶偶聯(lián)物和針對磷蛋白的抗體。不適合稀釋針對S100蛋白的抗體。	用于稀釋一抗或二抗。稀釋后的抗體可在2-8℃下保存數(shù)周。該通用抗體稀釋緩沖液已被用于血液學(xué)及組織學(xué)研究的免疫印跡。
免疫組化用抗體稀釋緩沖液	對組織或3D細(xì)胞培養(yǎng)物執(zhí)行免疫組化(IHC)研究。該緩沖液由含0.2%吐溫20、肝素、3%驢血清和5%DMSO的PBS組成。有助于抗體穿透至組織并封閉非特異性信號，有助于在任何組織或3D細(xì)胞培養(yǎng)物深度下實(shí)現(xiàn)清晰、明亮成像。可快速透明化用于3D成像的熒光標(biāo)記組織，最大限度地減少組織皺縮、膨脹或其他形態(tài)學(xué)變化，與大多數(shù)熒光基團(tuán)（包括染料和熒光蛋白）兼容。	抗體稀釋緩沖液用于稀釋一抗或二抗。

抗體稀釋緩沖液的pH值通常為7.0至7.4，這是因?yàn)檫@個(gè)范圍內(nèi)的緩沖液能夠更好地保持抗體的活性和結(jié)合特性。此外，緩沖液中的離子強(qiáng)度也會(huì)影響抗體的結(jié)合效果，因此在選擇稀釋緩沖液時(shí)需要考慮這些因素。

在使用抗體稀釋緩沖液時(shí)，通常需要根據(jù)抗體的效價(jià)和實(shí)驗(yàn)的具體要求進(jìn)行稀釋。一抗的稀釋比例可能從1:100到1:1000不等，稀釋后的抗體可以短期保存在4℃下，但效價(jià)會(huì)隨時(shí)間逐漸降低。

實(shí)驗(yàn)一、

胞外囊泡鑒定外周炎癥期間血腦通訊的新機(jī)制

試驗(yàn)二、

參與變形鏈球菌表面蛋白翻譯后修飾的 pgf 操縱子的表征

抗體稀釋緩沖液中pH值和離子強(qiáng)度影響

pH值的影響

pH值對抗體的穩(wěn)定性有顯著影響。研究表明，當(dāng)pH值大于6.5或小于8.5時(shí)，抗原抗體結(jié)合效率會(huì)受到嚴(yán)重影響。極端的pH值會(huì)導(dǎo)致抗體分子變性，破壞抗原識(shí)別表位，從而降低抗原抗體的結(jié)合效率。

抗體的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）在pH 7.4-7.6時(shí)形成強(qiáng)結(jié)合，但在pH 7時(shí)僅形成弱結(jié)合。這表明pH值在特定范圍內(nèi)對抗體的結(jié)合能力有顯著影響。天冬氨酸組成的CDR對pH變化敏感，隨著pH值的升高，免疫球蛋白之間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用增強(qiáng)。

離子強(qiáng)度的影響

離子強(qiáng)度通過靜電相互作用影響抗體與分析物的結(jié)合。當(dāng)離子強(qiáng)度低于0.005 M PBS時(shí)，IC50顯著增加；而當(dāng)離子強(qiáng)度高于0.01 M PBS時(shí)，IC50大幅降低。這表明鹽類會(huì)與抗體競爭，通過靜電相互作用與分析物競爭，從而降低分析的可檢測性。

大多數(shù)稀釋液含有毫摩爾量的氯化鈉或其他鹽，以減少帶電分子之間的非特異性相互作用。然而，過強(qiáng)的離子強(qiáng)度應(yīng)避免，因?yàn)樗赡軙?huì)克服高親和力抗體-表位結(jié)合所需的特定電荷相互作用。

注意事項(xiàng)

抗體稀釋緩沖液通常可在4℃下保存數(shù)月，使用前建議過濾以去除顆粒物，同時(shí)，針對特定實(shí)驗(yàn)需求，可能需要對緩沖液的配方進(jìn)行優(yōu)化以獲得最佳效果。

* 部分內(nèi)容來自網(wǎng)絡(luò)及論文

參考文獻(xiàn)

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