Transferrin結(jié)構(gòu)圖

轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin)于1945年首先在人血清中發(fā)現(xiàn)，為無血清培養(yǎng)基必需添加物組分，通過與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Transferrin Receptor, TfR) 相互作用，在無血清細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)揮重要功能。轉(zhuǎn)鐵蛋白能與三價鐵離子可逆性結(jié)合，調(diào)節(jié)鐵離子轉(zhuǎn)運及代謝，維持細(xì)胞內(nèi)的鐵平衡。我們對轉(zhuǎn)鐵蛋白的轉(zhuǎn)鐵作用都很了解，但其實它重要的意義在于維持細(xì)胞的生長和增殖，也就是說它有類似于生長因子的功能。而且，轉(zhuǎn)鐵蛋白也是一種重要的胞外抗氧化劑，可以避免細(xì)胞外環(huán)境中自由基的產(chǎn)生，防止細(xì)胞受到傷害。

無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（serum free medium， SFM）是指在使用中無需添加血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，且其組成成分不含有動物組分。按照其組分分類，還可以分為無動物組分無血清細(xì)胞培養(yǎng)基和化學(xué)限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基，前者組分中可能含有某些植物來源成分，而后者由化學(xué)成分明確的組分組成。其中，無動物組分無血清細(xì)胞培養(yǎng)基是目前在生物制藥行業(yè)中應(yīng)用廣泛，它提高了細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量，避免了使用血清帶來的麻煩。無血清培養(yǎng)基通常添加生長附加成分，如激素與生長因子、低分子營養(yǎng)成分和轉(zhuǎn)鐵蛋白等促細(xì)胞生長的附加成分，一般包括胰島素、孕酮、硒酸鈉、腐胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。轉(zhuǎn)鐵蛋白產(chǎn)品可增強在無血清培養(yǎng)中的雜交瘤、中國倉鼠卵巢（CHO）和其他哺乳動物真核細(xì)胞生長。

轉(zhuǎn)鐵蛋白是血漿中主要的鐵傳遞蛋白，為細(xì)胞內(nèi)化和細(xì)胞代謝提供所需的鐵。研究發(fā)現(xiàn)所有的細(xì)胞生長都離不開轉(zhuǎn)鐵蛋白。不但維持正常的細(xì)胞代謝依賴于以生物活性形態(tài)存在的鐵，鐵還是一些酶的輔助因子，比如RNA聚合酶，DNA合成酶。同時也是血紅蛋白的重要組成部分。

轉(zhuǎn)鐵蛋白是血漿糖蛋白，從血漿中分離而來，牛轉(zhuǎn)鐵蛋白以兩種分子形態(tài)存在，即分子量分別為74KD和78KD。每個轉(zhuǎn)鐵蛋白分子通過C端和N端結(jié)構(gòu)位點可以結(jié)合兩分子鐵離子，所以轉(zhuǎn)鐵蛋白以三種形態(tài)存在：脫鐵（不結(jié)合鐵離子），飽和鐵（結(jié)合兩分子鐵離子）和部分飽和，在生理情況下，轉(zhuǎn)鐵蛋白分子僅有1/3被鐵飽和。

Seebio牛轉(zhuǎn)鐵蛋白產(chǎn)品質(zhì)量源頭開始控制，牛血漿從正規(guī)農(nóng)場定制，進(jìn)行正規(guī)的檢驗檢疫。經(jīng)過多步色譜純化得到的轉(zhuǎn)鐵蛋白，需進(jìn)行60℃，10h的病毒滅活，然后用0.1μm濾膜過濾。產(chǎn)品最后要進(jìn)行包括純度，內(nèi)毒素，酸堿度，鐵含量，水分，微生物限度等檢查，以確保產(chǎn)品符合細(xì)胞培養(yǎng)要求。西寶生物提供的Bovine Transferrin（牛轉(zhuǎn)鐵蛋白）以高純度、熱處理、凍干粉狀態(tài)提供，并有脫鐵（apo）或飽和鐵（holo）兩種形式。

來源（Source）	牛血漿
CAS：（CAS Number）	11096-37-0
外觀（Appearance）	類白色凍干粉
pH(3% w/v soln)	6.0-8.0
純度（Purity）	≥95%（w/w總蛋白）
總蛋白（Total Protein）	≥95%w/w
生物負(fù)載（Bioburden）	≤100cfu/g
內(nèi)毒素（Endotoxin）	≤5EU/mg
溶解性（Solubility）	用PBS或者其它合適的溶劑在室溫下溶解0.5-2.0mg/ml
支原體（Mycoplasma）	Not Detected
應(yīng)用須知 (Application Notes）	牛轉(zhuǎn)鐵蛋白（HOLO）經(jīng)常在細(xì)胞和微生物培養(yǎng)中用作營養(yǎng)物質(zhì)，并在生物制藥生產(chǎn)中用作培養(yǎng)基補充。牛全運鐵蛋白可用于多種細(xì)胞類型。
其他說明（Other instructions）	除非另有說明，否則Seebio的產(chǎn)品僅用于研究或進(jìn)一步制造用途，不能直接用于人類。

1. 用作鐵轉(zhuǎn)運蛋白（Iron-transport protein)，幾乎所有培養(yǎng)基中都是必不可少的細(xì)胞培養(yǎng)添加劑，是無血清和低血清培養(yǎng)基中關(guān)鍵組成成分。
2. 起到生長因子的作用，提高體外培養(yǎng)細(xì)胞的性能。
3. 用作重組蛋白和生物制藥生產(chǎn)發(fā)酵培養(yǎng)基的一種營養(yǎng)添加劑。能提高單克隆抗體生產(chǎn)產(chǎn)量。
4. 用作毒性金屬離子的螯合劑，能夠清除溶液中有害的多價陽離子，起到解毒作用。
5. 用作分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白。
6. 用作受體以介導(dǎo)DNA等分子轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞。

轉(zhuǎn)鐵蛋白促進(jìn)細(xì)胞外鐵的儲存和運輸。轉(zhuǎn)鐵蛋白是重要的細(xì)胞外抗氧化劑。它們在生理條件下如此緊密地結(jié)合鐵，以至于幾乎不存在游離鐵來催化自由基的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)鐵蛋白向細(xì)胞輸送鐵是一個受體介導(dǎo)和控制的過程。細(xì)胞通過改變轉(zhuǎn)鐵蛋白受體表達(dá)來調(diào)節(jié)它們從細(xì)胞外環(huán)境中接受的鐵量，轉(zhuǎn)鐵蛋白對于絕大部分細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中生長是必需的，研究表明飽和鐵形態(tài)的轉(zhuǎn)鐵蛋白對于促進(jìn)細(xì)胞生長是有效的形態(tài)。轉(zhuǎn)鐵蛋白產(chǎn)品可增強雜交瘤、中國倉鼠卵巢（CHO）和其他哺乳動物真核細(xì)胞在無血清培養(yǎng)中的生長。

不同細(xì)胞，對轉(zhuǎn)鐵蛋白的需求量不同，一般原代細(xì)胞的推薦濃度為5 -100mg/L；中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)推薦濃度為10 -50mg/L；雜交瘤和Vero細(xì)胞推薦濃度為5 -20mg/L。具體使用濃度還是要根據(jù)細(xì)胞的種類、狀態(tài)和想要實現(xiàn)的功能來通過實驗確定。

Q1：培養(yǎng)基中應(yīng)該添加鐵飽和(Holo)轉(zhuǎn)鐵蛋白，還是脫鐵(Apo)轉(zhuǎn)鐵蛋白?
答：當(dāng)培養(yǎng)基中不含鐵或鐵含量較低時，選擇添加鐵飽和(Holo)的轉(zhuǎn)鐵蛋白；當(dāng)培養(yǎng)基中富含鐵時，選擇脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白。

Q2：鐵飽和(Holo)的轉(zhuǎn)鐵蛋白和脫鐵(Apo)的轉(zhuǎn)鐵蛋白，哪個效果好?
答：無法從理論上推斷出兩者的效果好壞，需要通過實驗檢測。

轉(zhuǎn)鐵蛋白凍干粉需要保存在冷藏狀態(tài)下，使用之前再溶解。一般用PBS或者其它合適的溶劑在室溫下將轉(zhuǎn)鐵蛋白凍干粉溶解成儲液，濃度在0.5-2.0mg/ml,然后用無菌濾膜進(jìn)行過濾，濾液可在無菌條件下2-8℃保存30天，長期保存請分裝后存放于-80℃。

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	儲存條件
DBM0012G-100mg	Bovine Transferrin (APO) 牛脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白	100mg	4℃
DBM0012G-1g	Bovine Transferrin (APO) 牛脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白	1g	4℃
DBM0012A-100mg	Bovine Transferrin (HOLO) 牛飽和鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白	100mg	4℃
DBM0012A-1g	Bovine Transferrin (HOLO) 牛飽和鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白	1g	4℃

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