肝素親和介質(zhì)——層析介質(zhì)優(yōu)選西寶生物

來(lái)源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2015-10-16 09:24:00【大中小】

肝素（Heparin）是一種含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III、凝血酶、類(lèi)凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII，也能和大腸桿菌表達(dá)的人白介素、人前列腺生長(zhǎng)因子、重組人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、軟骨生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組鼠肝素輔因子II、重組人血小板第四因子、重組人內(nèi)皮抑素、重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等生物大分子結(jié)合，所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類(lèi)物質(zhì)的純化。

西寶生物肝素親和層析介質(zhì)（Heparin QZT 6FF）以高交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)，采用環(huán)氧活化工藝，將肝素偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，該填料具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，配基不易脫落，使用壽命長(zhǎng)，使用方便，應(yīng)用廣泛。

一、產(chǎn)品特性

Heparin QZT 6FF親和介質(zhì)的理化性質(zhì)和產(chǎn)品特性如表1所示。

表1 Heparin QZT 6FF親和介質(zhì)的理化性質(zhì)和產(chǎn)品特性

參數(shù)	指標(biāo)
基質(zhì)	6%交聯(lián)瓊脂糖凝膠
配基	Heparin
形狀	球形
介質(zhì)平均粒徑	90 μm (45-165)
配基密度	3.5 mg heparin/mL wet gel
動(dòng)態(tài)載量	2 mg AT III/mL wet gel
流速高達(dá)（25℃）	600 cm/h
推薦流速	<150 cm/h
耐壓高達(dá)	0.3 MPa (3 bar)
pH穩(wěn)定性	4-12（長(zhǎng)時(shí)間）；4-13（短時(shí)間）
保存	4-8 ℃（0.05 M乙酸鈉+20%乙醇）

二、應(yīng)用范圍

西寶生物肝素親和層析介質(zhì)廣泛用于抗凝血因子III、凝血酶、類(lèi)凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII等生物大分子的分離純化。

三、操作步驟

層析操作通常包括裝柱、平衡、進(jìn)料、淋洗、洗脫、再生等步驟。

平衡：用5-10CV的平衡緩沖液（20-50 mM PB或Tris/HCl，pH 7.4-8.0，可加入0.15 M NaCl抑制非特異吸附）平衡層析柱，至流出液電導(dǎo)和pH不變（與平衡液一致）。
進(jìn)料：樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應(yīng)經(jīng)離心或微濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計(jì)算。
淋洗：上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線(xiàn)。
洗脫：用洗脫緩沖液（20-50 mM PB或Tris/HCl+1-2 M NaCl，pH 7.4-8.0，NaCl濃度需要根據(jù)目標(biāo)蛋白的結(jié)合力進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整）洗脫，收集流出液。可采用線(xiàn)性梯度或階越式梯度洗脫。
原位清洗：為了避免不同樣品間的相互干擾，或者當(dāng)介質(zhì)污染比較嚴(yán)重時(shí)（反壓增加），需要對(duì)介質(zhì)進(jìn)行在位清洗。

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合的蛋白，可用2-3 CV以上的2 M NaCl清洗，并用3 CV以上的純水沖洗。

（2）對(duì)沉淀或變性蛋白蛋白，可用0.1 M NaOH清洗（1-2 h），并用3-10 CV平衡液和3 CV以上的純水沖洗。也可用6 M Gua-HCl或8M urea清洗（0.5-1 h）。

（3）對(duì)疏水性結(jié)合的蛋白，可用0.1-0.5%的非離子去污劑清洗（1-2 h），并用3-10 CV的純水沖洗。

其它注意事項(xiàng)：在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

四、具體應(yīng)用實(shí)例

轉(zhuǎn)基因羊奶中抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的分離純化

層析柱：2.5 cm × 1.0 cm I.D.，CV=2 mL

樣品：預(yù)處理的轉(zhuǎn)基因羊奶（0.45 µm濾膜過(guò)濾，上樣10 mL）

平衡緩沖液（A）：50 mM Tris/Hcl, pH 7.2

洗脫緩沖液（B）：50 mM Tris/Hcl+1 M NaCl, pH 7.2

流速：1 mL/min

圖1 Heparin QZT 6FF親和層析譜圖圖2 肝素親和層析所得樣品SDS-PAGE圖

（1. 西寶介質(zhì)的洗脫峰P1；2.西寶介質(zhì)的洗脫峰P2；3. 進(jìn)口介質(zhì)的洗脫峰P1；4. 進(jìn)口介質(zhì)的洗脫峰P2）

五、特色服務(wù)

（1）提供介質(zhì)篩選及工藝開(kāi)發(fā)的咨詢(xún)。

（2）接受客戶(hù)委托開(kāi)發(fā)各種分離介質(zhì)和分離工藝。

（3）按客戶(hù)要求提供各種規(guī)格的預(yù)裝柱。

（4）為客戶(hù)提供售前和售后服務(wù)。

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