幽門螺桿菌(HP.CagA)-磁微?；瘜W發光法（AE/AP）解決方案

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-07-30 12:06:00【大中小】

1.項目背景

摘自《體檢人群幽門螺桿菌血清學檢測專家共識》

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, Hp)是一種革蘭氏陰性桿菌，是危害人類健康最常見的病原體之一。1994年，世界衛生組織(WHO)將Hp定義為Ⅰ類致癌因子。2021年，美國公共衛生機構將Hp列為新增的致癌物，進一步引起我國公眾對Hp感染的重視，隨之增加了在健康體檢中檢測Hp的意向。此外，Hp感染還與慢性胃炎、消化性潰瘍、黏膜相關淋巴組織(mucosaassociated lymphoid tissue, MALT)淋巴瘤等疾病的發生密切相關。我國人群的Hp感染率仍然維持高位(～50%)，多數感染者并無明顯消化道癥狀或相關并發癥，類似“健康帶菌狀態”，實際上感染者的胃黏膜可能已經發生慢性炎癥，甚至出現萎縮、腸化等癌前狀態。

按照我國最新版的《第六次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告》，對于Hp的診斷方法推薦尿素呼氣試驗、單克隆糞便抗原試驗和血清學檢測方法。國際Hp馬斯特里赫特Ⅳ共識亦指出，血清學檢測方法是唯一一個不受胃內細菌定植狀況影響的檢測方法，尤其在胃內Hp細菌數量少的時候，其他檢測方法會出現假陰性，而血液中針對Hp抗原、特別是CagA等特異性抗原的抗體水平相對穩定，不受感染程度和治療的影響，更易于檢測。

Hp馬斯特里赫特Ⅴ共識亦強調，經過當地驗證高度準確的血清學試驗可用于非侵入性Hp感染診斷。Hp的CagA和VacA蛋白是重要致病因子，檢測血清抗CagA、VacA抗體，可以評價Hp菌株的毒力水平。

Hp血清學檢測具有操作簡單、適用范圍廣、成本效益高等優勢，常用于Hp流行病學調查研究。隨著人們對Hp認識的不斷深入，Hp毒力分型檢測已被廣泛應用于體檢人群，尤其是處于胃癌高發地區、有胃癌家族史及40歲以上的體檢人群。通過對Hp分型檢測，有助于判定感染Hp的不同毒力水平，在體檢人群中發現CagA和VacA陽性Hp感染的高風險人群意義重大，可以促進對于該類人群Hp感染的早診早治，進而降低Hp相關消化道疾病特別是胃癌的發生率。

Hp毒力因子CagA和VacA抗體檢測 Hp致病基于其可以產生多種毒力因子，隨著Hp致病機理研究的進展，新的毒力因子不斷被發現。大量的研究結果表明，在目前眾多Hp的毒力因子中，CagA和VacA最具臨床指導意義。《中國幽門螺桿菌根除與胃癌防控的專家共識意見》指出，CagA和VacA是Hp最為重要的毒力因子。根據是否表達CagA和(或)VacA這兩種毒力因子可將Hp分為Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型Hp菌株CagA和/或VacA蛋白表達陽性，為致病性較強的產細胞毒素菌株，Ⅱ型Hp菌株CagA和VacA蛋白均不表達，為不產生主要毒力因子的菌株。

鑒于Hp的UreA(尿素酶 A)、UreB(尿素酶B)、CagA和VacA蛋白等Hp結構成分或毒力蛋白，被Hp分泌產生后可以刺激機體免疫系統產生相應的血清抗體，借助血清Hp相關抗體可以反映受檢者的Hp感染情況，從而實現對Hp的毒力分型。

西寶生物開發的高質量幽門螺旋桿菌(CagA)重組抗原，可應用于體外診斷幽門螺桿菌抗體IgG/IgM檢測試劑盒開發，適用于化學發光等多種應用場景，助力腸道研究防控無“幽”。

2. 配對方式

針對細胞毒素相關蛋白A(CagA)的檢測，西寶生物推出1種CagA抗原及鼠抗人IgG單抗。具體配對方式如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行更為詳細的驗證）。

2.1化學發光（AE）平臺—間接法

組合1：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被羧基磁珠+鼠抗人IgG單抗（貨號：EKN0255B）標記吖啶酯；

2.2化學發光（AP）平臺—雙抗原夾心法

組合2：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被羧基磁珠+HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）標記堿性磷酸酶；

3.臨床性能

3.1化學發光（AE）平臺：

選取NMPA獲證試劑為參考系統。對西寶生物（AE）與參考系統的CagA測值結果分別根據其參考值（西寶生物（AE）：COI≥1為陽性，COI＜1為陰性；參考系統：≥6為陽性，＜6為陰性）進行陰陽性判定，并對判定結果進行四格表分析，結果如下：

		西寶生物（AE）		合計
		+	-	合計
參考系統	+	24	5	29
參考系統	-	3	47	50
合計		27	52	79

靈敏度：24/29×100%=82.8%

特異性：47/50×100%=94%

符合率：（24+47）/79×100%=91.1%

圖1為AE平臺檢測臨床樣本發光值分布，CagA陰性組發光值均值與CagA陽性組發光值均值能夠明顯區分。由表1數據可得，3例假陽性樣本及5例假陰樣本均落在參考系統的cutoff附近，屬于灰區，需要用第三方試劑進行確認。西寶生物AE組合與參考系統的靈敏度大于80%，特異性及符合率大于90%，說明兩種試劑的臨床符合率較高。

圖1 AE平臺檢測臨床樣本發光值分布

表1 西寶生物AE組合測試結果

3.2化學發光（AP）平臺：

選取NMPA獲證試劑為參考系統。對西寶生物（AP）與參考系統的CagA測值結果分別根據其參考值（西寶生物（AP）：COI≥1為陽性，COI＜1為陰性；參考系統：≥6為陽性，＜6為陰性）進行陰陽性判定，并對判定結果進行四格表分析，結果如下：

		西寶生物（AP）		合計
		+	-	合計
參考系統	+	25	4	29
參考系統	-	3	47	50
合計		28	51	79

靈敏度：25/29×100%=86.2%

特異性：47/50×100%=94%

符合率：（25+47）/79×100%=91.1%

圖2為AP平臺檢測臨床樣本發光值分布，CagA陰性組發光值均值與CagA陽性組發光值均值能夠明顯區分。由表2數據可得，3例假陽性樣本及4例假陰樣本均落在參考系統的cutoff附近，屬于灰區，需要用第三方試劑進行確認。西寶生物AP組合與參考系統的靈敏度大于85%，特異性及符合率大于90%，說明兩種試劑的臨床符合率較高。

圖2 AP平臺檢測臨床樣本發光值分布

表2 西寶生物AP組合測試結果

4. 測試方案

4.1化學發光（AE）平臺-抗體配對組合1

樣本:樣品加樣量10ul；

試劑1：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：鼠抗人IgG單抗（貨號：EKN0255B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：10ul樣本+50ul試劑1混合，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入預激發液及激發液，進行測試。

測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。

4.2化學發光（AP）平臺-抗體配對組合2：

樣本:樣品加樣量10ul；

試劑1：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：10u樣本+50ul試劑1+50ul試劑2+混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，進行測試。

測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。

5.產品信息

產品名稱	貨號	推薦配對
幽門螺旋桿菌(CagA)重組抗原	EDD0033C	HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被羧基磁珠+鼠抗人IgG單抗（貨號：EKN0255B）標記吖啶酯（發光配對組合1） HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被羧基磁珠+HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）標記堿性磷酸酶（發光配對組合2）
鼠抗人IgG單克隆抗體	EKN0255B
HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被羧基磁珠濃縮液	DKY1316C
鼠抗人IgG單抗（貨號：EKN0255B）吖啶酯濃縮液	DKY1332A
HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）標記堿性磷酸酶濃縮液	DKY1316E
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 發光底物液（即用型）	DCD0517B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C