干細(xì)胞基質(zhì)膠-iMatrix系列

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-09-20 15:03:00【大中小】

1、iMatrix-511層粘連蛋白511

◆什么是層粘連蛋白511？

層粘連蛋白是存在于動物基底膜的一種細(xì)胞外基質(zhì)，已知其與細(xì)胞粘附和增殖息息相關(guān)。本產(chǎn)品是與層粘連蛋白 511-E8 片段有同一序列的重組蛋白，是可以促進(jìn)各種細(xì)胞粘附和伸展的培養(yǎng)基質(zhì)。

大阪大學(xué)和京都大學(xué)共同研究開發(fā)，本產(chǎn)品已證明在操作難度很大的人 iPS 細(xì)胞和人 ES 細(xì)胞培養(yǎng)中，也可以安全且高效地進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)的準(zhǔn)備很簡單！
可用于多種類型的細(xì)胞培養(yǎng)！
無論分離細(xì)胞的狀態(tài)如何，可實現(xiàn)細(xì)胞的高生存率和細(xì)胞增殖的高效性！
重組蛋白（CHO-S細(xì)胞來源），所以混入雜質(zhì)的危險性低！
溶液型試劑，無需溶解，稀釋后可直接使用

層粘連蛋白511是由 α5 鏈、β1 鏈和 γ1 鏈組成的層粘連蛋白。層粘連蛋白 511-E8 是層粘連蛋白片段，但其具有與層粘連蛋白全長分子相同的 α6β1 整合蛋白連接功能。

本產(chǎn)品是 Nippi 根據(jù)大阪大學(xué)和京都大學(xué)的專利技術(shù)生產(chǎn)販賣的。

◆使用方法

1. 用 PBS（-）稀釋本產(chǎn)品，按照 0.1-1.5μg/cm2加入細(xì)胞培養(yǎng)器皿中。

※由于細(xì)胞種類和細(xì)胞株的不同、使用的培養(yǎng)基種類不同，添加的適宜劑量會有差異，初次使用時，按照 0.5 μg/cm2添加培養(yǎng)容器中，逐漸調(diào)整至適合使用濃度。

2.室溫下孵育 3 小時，然后去掉溶液。

3. 添加細(xì)胞和培養(yǎng)液，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng) ES/iPS 細(xì)胞時，可進(jìn)行無飼養(yǎng)層和單細(xì)胞繼代培養(yǎng)

◆使用案例

使用本產(chǎn)品對表皮細(xì)胞培養(yǎng) 0.5 小時，對血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) 1 小時。

(a) 表皮細(xì)胞，培養(yǎng) 0.5 小時

(b) 左（無涂層）：大部分細(xì)胞未貼壁。

(d) 血管內(nèi)皮細(xì)胞，培養(yǎng) 1 小時

左（無涂層）：有貼壁的細(xì)胞，但大部分多為圓形。

右（iMatrix）：較少觀察到圓形細(xì)胞，幾乎所有的細(xì)胞表現(xiàn)出了很好的伸展性。

實驗人員：(株) Nippi BioMatrix 研究所藤崎

◆iMatrix-511 與 iMatrix-511 silk 的區(qū)別

	iMatrix-511	iMatrix-511 silk
生產(chǎn)系統(tǒng)	轉(zhuǎn)基因 CHO-S 細(xì)胞	轉(zhuǎn)基因蠶生產(chǎn)系統(tǒng)
提純材料	CHO-S 細(xì)胞培養(yǎng)上清	蠶蛹蛋白
產(chǎn)品等級	實驗研究用* *有臨床用級別	實驗研究用
導(dǎo)入基因	人層粘連蛋白 511-E8 片段
純度	95% 以上
濃度	0.5 mg/mL
解離常數(shù)	10 nM 以下
使用期限	生產(chǎn)后 2 年內(nèi)
iPS 細(xì)胞培養(yǎng)能力	添加 0.5 μg/cm2 到培養(yǎng)容器中，可用于 iPS 細(xì)胞的維持培養(yǎng)

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號	生產(chǎn)商編號	產(chǎn)品名稱	包裝
385-07361	892011	iMatrix-511 solution(0.5 mg/mL) 層粘連蛋白511-E8片段，溶液（0.5 mg/mL）	175 µg×2 （350 µL×2)
381-07363	892012		175 µg×6 （350 µL×6)
387-10131	892021	iMatrix-511 Silk 層粘連蛋白511 Silk	175 μg ×6

◆ iMatrix-511 與 Easy iMatrix-511的區(qū)別

Easy iMatrix-511 是可以直接應(yīng)用于培養(yǎng)孔板涂層的稀釋溶液，有 iMatrix-511 和 iMatrix-511 silk 兩種類型的稀釋溶液。

本品 1 支（100 mL）可用于大約 11 塊 6 孔板。

培養(yǎng)孔板涂層后 iMatrix-511 及 iMatrix-511 silk 的使用方法相同。

產(chǎn)品名稱	Easy iMatrix-511 （iMatrix-511 稀釋型）	Easy iMatrix-511 silk （iMatrix-511 silk 稀釋型）
產(chǎn)品編號	380-13041	387-13051
轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)	人層粘連蛋白 511E8 片段
轉(zhuǎn)基因蛋白表達(dá)系統(tǒng)	轉(zhuǎn)基因 CHO-S 細(xì)胞	轉(zhuǎn)基因蠶表達(dá)系統(tǒng)
產(chǎn)品形態(tài)	稀釋溶液
容量	100 mL（可包被約 11 塊 6 孔板）
儲存條件	2-15℃
備注	含有重組 HSA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	提純原料	規(guī)格
380-13041	Easy iMatrix-511 層粘連蛋白511	iMatrix-511	100 ｍL
387-13051	Easy iMatrix-511 Silk 層粘連蛋白511 蠶來源	iMatrix-511 Silk	100 mL

常見問題：

Q1：產(chǎn)品是以什么形式銷售的？

A1：產(chǎn)品是液體狀。一支試管里密封裝有0.5 mg/mL濃度的175 μg的細(xì)胞培養(yǎng)外基質(zhì)（層粘連蛋白511-E8片段）。※iMatrix-511的凍干產(chǎn)品已于2015年3月停止生產(chǎn)。

Q2.：產(chǎn)品的存儲條件和有效期是什么？

A2.：產(chǎn)品的儲存條件為，冷藏保存在2-8°C。（推薦4°C）

2-8°C冷藏條件下產(chǎn)品的有效期，請參考下表。

產(chǎn)品	保質(zhì)期
iMatrixTM-511,iMatrixTM-511silk, iMatrixTM-511MG,iMatrixTM-411, iMatrixTM-221	自生產(chǎn)后兩年內(nèi)
Easy iMatrixTM-511, Easy iMatrixTM-511 silk	自生產(chǎn)后6個月-1年
Quick iMatrixTM-511, Quick iMatrixTM-511 silk	自生產(chǎn)后6個月

※具體的有效期詳見產(chǎn)品外包裝。

Q3：可以冷凍保存嗎？

A3：不可以冷凍保存。

Q4.：產(chǎn)品的純度是多少？

A4.：純度為95%以上。

Q5.：培養(yǎng)hES/hiPS細(xì)胞時使用什么培養(yǎng)基更好？

A5.：宮崎等的論文（Nature communications,3(1236), 1-10, 2012）、（Scientific Reports,7, 41165, 2017）中，使用了以下的培養(yǎng)基。

?mTeSR1,TeSR2,TeSR-E8 (STEMCELL Technologies)

?Stem Pro hESC SFM (Thermo Fisher Scientific)

?StemFit AK03 (Ajinomoto)

中川等的論文（Scientific Reports,4(3594), 1-7, 2014）中使用了以下的培養(yǎng)基。

?StemFit (Ajinomoto)

文獻(xiàn)中使用的培養(yǎng)基都出現(xiàn)了良好的結(jié)果。

Q6.：培養(yǎng)iPS細(xì)胞時，適宜的涂層濃度是多少？

A6.：適宜的涂層濃度根據(jù)細(xì)胞株的不同也會有所不同。

一開始請從濃度0.5 μg/cm2開始嘗試，請根據(jù)您使用的細(xì)胞株在濃度0.1~1.5 μg/ cm2之間考慮。另外，還有文獻(xiàn)報道了新的不以涂層包被的添加法。Miyazaki et al.Scientific Reports,7, 41165, (2017)

Q7.：請教我使用iMatrix-511時，培養(yǎng)iPS細(xì)胞的步驟。

A7.：使用iMatrix-511時，ES/iPS細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng)步驟，請參考以下的鏈接。

https://www .cira.kyoto-u.ac.jp/j/research/img/protocol/Ff-iPSC-culture_protocol_E_v140311.pdf

Q8.：培養(yǎng)iPS細(xì)胞時，需要Rock Inhibitor（Y-27632）嗎？

A8.：在中川等的論文（Scientific Reports,4(3594), 2014）中，介紹了只有在傳代時添加Rock Inhibitor，更換培養(yǎng)基的時候不需使用。

Q9.：培養(yǎng)iPS細(xì)胞時可以單細(xì)胞傳代嗎。

A9.：可以。可參考中川等的論文（Scientific Reports,4(3594), 2014。

或參考以下的鏈接。

https://www.cira.kyoto-u.ac.jp/j/research/img/protocol/Ff-iPSC-culture_protocol_E_v140311.pdf

Q10：傳代時使用什么細(xì)胞分離液？

A10：可使用胰蛋白酶。可以參考中川等的論文（Scientific Reports,4(3594), 2014）。

或參考以下鏈接https://www.cira.kyoto-u.ac.jp/j/research/img/protocol/Ff-iPSC-culture_protocol_E_v140311.pdf

Q11.：可以使用小鼠的iPS細(xì)胞嗎？

A11.：暫時沒有小鼠iPS細(xì)胞的培養(yǎng)數(shù)據(jù)。

Q12.：這個產(chǎn)品與基質(zhì)膠有什么不同?

A12.：基質(zhì)膠的層粘連蛋白-111來源于小鼠EHS肉瘤。另外還含有層粘連蛋白以外的分子。

iMatrix-511是將在CHO-S細(xì)胞中表達(dá)的層粘連蛋白511-E8片段高度純化后的重組蛋白。

iMatrix-511silk是從蠶結(jié)的繭中高純度純化層粘連蛋白511-E8片段的重組蛋白。

已知人ES細(xì)胞和iPS細(xì)胞是通過細(xì)胞膜受體（特別是α6β１整聯(lián)蛋白）粘附于層粘連蛋白-511。已知人ES細(xì)胞和iPS細(xì)胞對層粘連蛋白-511具有高粘附活性。這使得用iMatrix-511/iMatrix-511silk可以使iPS細(xì)胞在單細(xì)胞狀態(tài)下傳代。

宮崎等的論文表明（Nature communications,3(1236), 1-10, 201），5次傳代后（30天后）的細(xì)胞數(shù)擴(kuò)增效率約為基質(zhì)膠的200倍。

產(chǎn)品的相關(guān)技術(shù)文章，請點擊：使用層粘連蛋白的非包被法對人hPSC進(jìn)行有效的貼壁培養(yǎng)iMatrix-511, iMatrix-511 silk http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/resources/show/57.html

◆ iMatrix系列

2、iMatrix-332

iMatrix-332是高純度人層粘連蛋白332-E8片段（包含整合素結(jié)合位點）的產(chǎn)品。

層粘連蛋白-332存在于角質(zhì)形成細(xì)胞和角膜中，已知能夠與整合素α3β1蛋白結(jié)合。

產(chǎn)品編號	廠家編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
380-20533	892031	iMatrix-332	175μgX2
388-20534	892032	iMatrix-332	175μgX6

3、iMatrix-221

iMatrix-221是高純度人層粘連蛋白221-E8片段（包含整合素結(jié)合位點）的產(chǎn)品。層粘連蛋白221是由α2鏈、β2鏈和γ1鏈的亞基鏈組成的層粘連蛋白分子，與層粘連蛋白211同時大量存在于心肌、骨骼肌等肌肉組織的基底膜中，被認(rèn)為與肌肉細(xì)胞分化和功能維持相關(guān)。另外，層粘連蛋白221和層粘連蛋白211會與肌肉組織中選擇性表達(dá)的整合素α7X2β1蛋白結(jié)合。據(jù)報告顯示，在與整合素α7X2β1結(jié)合的親和性方面，層粘連蛋白221比層粘連蛋白211更高。

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
380-13801	iMatrix-221 層粘連蛋白221	175 μg×2
386-13803	iMatrix-221 層粘連蛋白221	175 μg×6

4、iMatrix-111

iMatrix-111是高純度人層粘連蛋白111-E8片段（包含整合素結(jié)合位點）的產(chǎn)品。已知層粘連蛋白111存在于肝臟中，能夠與整合素α7X2β1蛋白和α6β1蛋白結(jié)合，被認(rèn)為與維持肝臟功能有關(guān)。

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
383-20523	iMatrix-111	175μgX2
381-20524	iMatrix-111	175μgX2

5、iMatrix-411血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化誘導(dǎo)

iMatrix-411利用CHO-S細(xì)胞生產(chǎn)的高純度人層粘連蛋白411-E8片段產(chǎn)品。
● 將人層粘連蛋白411-E8 片段基因?qū)隒HO-S細(xì)胞生產(chǎn)的高純度提取物。
● 把使用iMatrix-511培養(yǎng)的iPS細(xì)胞在iMatrix-411中培養(yǎng)，可以促進(jìn)其向血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化誘導(dǎo)。
● 可進(jìn)行無飼養(yǎng)層培養(yǎng)。