抗體結(jié)合親和配基的選擇

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-09-28 09:06:00【大中小】

通常我們在做抗體純化實驗時，都會用到親和填料，親和填料特異性極強(qiáng)，分辨率高，選擇合適的親和填料對分離抗體至關(guān)重要。那么我們科研和生產(chǎn)中又該怎么去選擇呢？以下有小編分享的選擇思路：

1）首選protein A

Protein A有耐堿形式的突變體，它更加穩(wěn)定，脫落更少。因此，在protein A可以結(jié)合的情況下，它的一些純化性質(zhì)比protein G/L更加清楚，首選protein A親和填料。選擇protein A親和填料，需要配套選擇pH8.5-9.0的結(jié)合緩沖液，實現(xiàn)更好的結(jié)合。

2）次選protein G

羊抗體和protein A結(jié)合性質(zhì)不好，小鼠的IgG1和proteinA結(jié)合也不好，此時可以選擇protein G，人的抗體和protein A/G結(jié)合都不錯，但考慮到鹽濃度，pH梯度等影響，選擇protein G操作更簡單，方便，只要使用PBS對樣品進(jìn)行一定程度的稀釋，就可以很好的和protein G親和填料結(jié)合。

3）protein L的選擇

在protein A/G的結(jié)合效果都不好的時候，protein L是一個很好的補(bǔ)充，它結(jié)合抗體的kappa輕鏈。對于多抗來說，需要判斷kappa和lamda輕鏈的比例，如果lamda輕鏈的比例占優(yōu)勢，使用protein L純化，將損失較多的目的抗體。對于單抗來說，如果不管是鼠抗，還是兔抗，kappa鏈都占有優(yōu)勢，可以嘗試protein L純化。這種填料純化的純度也很不錯，但是請注意的是：kappa輕鏈也有多種亞型，并不是每一種都可以和protein L結(jié)合。

4）thiophilic resin的選擇

有一些單抗，對于protein A/G/L的結(jié)合都不好，在優(yōu)化了pH、鹽濃度之后，還是解決不了問題。此時可以嘗試親硫膠純化（thiophilicresin）。這種填料和抗體之間的結(jié)合并不是十分特異，基本上通過緩沖液中的硫酸根的僑聯(lián)作用和目標(biāo)分子上的巰基發(fā)生作用。要提高純度的話，推薦使用鹽的梯度洗脫（硫酸鹽從500 mM逐漸降低）。這種填料的優(yōu)勢在于，洗脫條件非常溫和（可以PBS洗脫），對于不穩(wěn)定的抗體來說，有重要價值。

5）抗原親和填料的選擇

以上這些抗體純化填料，并不能區(qū)別特異性抗體與非特異性抗體。要獲得特異性最高的抗體，可以使用抗原親和柱。常規(guī)能夠偶聯(lián)抗原的填料包括：氨基活化填料、羧基活化填料、醛基活化填料、NHS活化填料、碘乙酸活化填料等，經(jīng)典的溴化氰活化填料偶聯(lián)速度快，載量高，受到歡迎。但要注意：溴化氰活化填料穩(wěn)定性較差，容易造成抗原脫落，并不是最好的選擇。

小編奉上以上抗體填料相關(guān)知識，讓您的抗體純化質(zhì)量更高，當(dāng)然也不會落下送您一波優(yōu)質(zhì)填料產(chǎn)品，欲知詳情請撥打400-021-8158

重組蛋白A

貨號	中文名稱	包裝規(guī)格
ECL0019G	重組蛋白A	1mg
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ECL0019H	重組蛋白A（(從PB緩沖液中凍干)）	10mg

重組蛋白G

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