microRNA和piRNA研究

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2014-07-09 14:43:00【大中小】

microRNA和piRNA研究

AGO蛋白家族

AGO蛋白家族是指與以小分子RNA(small RNA)為介質(zhì)的遺傳基因發(fā)現(xiàn)控制機(jī)構(gòu)有關(guān)的蛋白質(zhì)群。基于氨基酸序列的相似性，AGO蛋白家族又分為AGO亞族與PIWI亞族，已發(fā)現(xiàn)在生殖細(xì)胞、干細(xì)胞（ES、iPS等）中有表達(dá)。

和光純藥公司推出了眾多用于對miRNA和mRNA（存在于細(xì)胞和組織中的RISC的組成成分）進(jìn)行功能分析的工具，這些工具不僅適用于對miRNA的分析，同時也適用于對靶標(biāo)mRNA的分析。

	AGO蛋白家族
	AGO亞族	PIWI亞族
人	AGO1, AGO2, AGO3, AGO4	PIWIL1 / HIWI, PIWIL2 / HILI, PIWIL3, PIWIL4 / HIWI2
鼠	AGO1, AGO2, AGO3, AGO4	PIWIL1 / MIWI, PIWIL2 / MILI, PIWIL4 / MIWI2
RNA結(jié)合蛋白	microRNA、siRNA等	piRNA等

1. microRNA研究
 （1）microRNA純化試劑盒系列：
（2）cDNA編碼microRNA試劑盒的制備
 （3）抗體
2. piRNA研究

【產(chǎn)品信息】

1. microRNA研究

microRNA（簡稱miRNA）是一種長約22個nt（核苷酸）的內(nèi)源性RNA分子，通過與靶標(biāo)mRNA的互補(bǔ)配對，可抑制mRNA的裂解和翻譯，從而在動植物體內(nèi)發(fā)揮重要的調(diào)控作用。據(jù)推測，在人體和鼠體內(nèi)存在上千種miRNA，因此對于miRNA的各種研究（例如對功能不明的新型miRNA的鑒定以及對與特定疾病相關(guān)的miRNA功能的說明等）迅速發(fā)展成為一大研究領(lǐng)域。近來，血清中存在miRNA這一重大事實的發(fā)現(xiàn)，開創(chuàng)了利用miRNA作為生物標(biāo)志物進(jìn)行包括癌癥在內(nèi)的疾病治療的醫(yī)學(xué)未來。一般認(rèn)為，microRNA發(fā)揮作用的方式如下：先在細(xì)胞中經(jīng)過多個階段發(fā)育成熟，再與蛋白質(zhì)結(jié)合生成蛋白質(zhì)復(fù)合物“RISC”（“RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物”），然后與RISC主要組成部分AGO亞族蛋白結(jié)合，后再與靶標(biāo)mRNA結(jié)合，從而達(dá)到降解mRNA鏈或抑制翻譯的目的。

人體中存在4種AGO亞族蛋白（hAgo1～hAgo4），可泛表達(dá)基因信息，但表達(dá)水平因類型而異。在AGO亞族蛋白中，只有AGO2具備對靶標(biāo)RNA 裂解的切割酶活性，因此是一種具表達(dá)水平的蛋白質(zhì)，可在miRNA合成途徑中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。由于RISC能夠與AGO蛋白抗體發(fā)生免疫沉淀，因此可從RISC沉淀物中回收miRNA；而且進(jìn)一步研究表明，靶標(biāo)miRNA為共沉淀劑，因此免疫沉淀成法為研究miRNA功能的基本方法。

鑒于上述情況，和光純藥特別推出了眾多對miRNA功能進(jìn)行分析的工具，其中主要為利用抗AGO抗體的miRNA研究工具。通過組合使用上述工具，即可實現(xiàn)對miRNA和mRNA（存在于細(xì)胞和組織中的RISC的組成成分）的綜合分析— miRNA分析和靶標(biāo)mRNA分析。

▲ Page Top

（1） microRNA純化試劑盒系列：

一種基于利用AGO蛋白抗體的免疫沉淀方法

特性：

1）適用于內(nèi)源性AGO蛋白的免疫沉淀法
2）miRNA與AGO蛋白結(jié)合的純化性能高
3）其他RNA（如rRNA（核糖體）和RNA的降解片段）的污染度低
4）適用于microRNA的高效克隆以及純化microRNA成分的微陣列技術(shù)（測定基因表達(dá)譜的方法和技術(shù)）

microRNA提取試劑盒，人/鼠AGO1（10次反應(yīng)；產(chǎn)品編號：291-70201）
microRNA提取試劑盒，人AGO2（10次反應(yīng)；產(chǎn)品編號：292-66701）
microRNA提取試劑盒，鼠AGO2（10次反應(yīng)；產(chǎn)品編號：292-67301）
microRNA提取試劑盒，人AGO3（10次反應(yīng)；產(chǎn)品編號：297-70301）

如果您對上述產(chǎn)品感興趣，請致電400-021-8158了解更多詳細(xì)情況!

▲ Page Top

（2）cDNA編碼microRNA試劑盒的制備

和光純藥microRNA克隆試劑盒可以用于制備cDNA編碼microRNA，只需在microRNA片段制備后的1.5日之內(nèi)即可完成克隆過程。該試劑盒中含有從蝦中提取的堿性磷酸酶（SAP），能與其中的耐熱性單鏈DNA連接酶（另售）和原改良接頭發(fā)生連接反應(yīng)。與傳統(tǒng)方法（利用從細(xì)菌中提取的堿性磷酸酶和T4 RNA連接酶）相比，克隆效率顯著提高。

特點：

1）耐熱性連接酶能夠?qū)崿F(xiàn)接頭的準(zhǔn)確連接，從而提高克隆效率
2）適用于microRNA克隆以形成二級結(jié)構(gòu)
3）操作簡單，只需在1.5日之內(nèi)即可生成cDNA編碼microRNA

和光microRNA克隆試劑盒（8次反應(yīng)；產(chǎn)品編號：290-66501）

接頭連接高效、準(zhǔn)確、簡捷

耐熱性單鏈DNA連接酶重組體解決方案（200個單位（產(chǎn)品編號：298-65103）；500個單位（產(chǎn)品編號：292-65101）

和光靶標(biāo)mRNA克隆試劑盒（10次反應(yīng)；產(chǎn)品編號：298-68001）

和光純藥生產(chǎn)的靶標(biāo)mRNA克隆試劑盒用于借助微量mRNA實現(xiàn)cDNA擴(kuò)增，尤其是利用AGO IP RNA片段實現(xiàn)microRNA靶標(biāo)mRNA克隆。擴(kuò)增后的cDNA將成為microRNA的靶標(biāo)mRNA。

特點：

1）方法簡易
2）具備實現(xiàn)微量mRNA擴(kuò)增的性能
3）cDNA擴(kuò)增方式不依賴于mRNA的長度
4）適用于microRNA靶標(biāo)mRNA的研究

和光PCR純化試劑盒（30次反應(yīng)（產(chǎn)品編號：298-67901）

和光純藥生產(chǎn)的PCR純化試劑盒，用于在利用RT-PCR或PCR完成DNA合成后的僅10分鐘內(nèi)去除在各種分子生物學(xué)試驗反應(yīng)緩沖液中形成的引物、引物二聚體、dNTP（三磷酸脫氧核苷酸）以及諸如DNA聚合酶、限制性內(nèi)切酶等多種酶。

THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含鎂離子的緩沖液） （250個單位；產(chǎn)品編號：317-07081），PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）用耐熱性DNA聚合酶

建議采用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含鎂離子的緩沖液）來抑制非特異性擴(kuò)增。THUNDER Taq Gold DNA聚合酶用于PCR的熱啟動，在進(jìn)入PCR循環(huán)前，在95℃的溫度下經(jīng)過10分鐘的熱處理后被活化。由于利用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含鎂離子的緩沖液）方式實現(xiàn)擴(kuò)增后的DNA片段是一種腺嘌呤的3'末端，因此能夠直接插入到T載體中。

如果您對上述產(chǎn)品感興趣，請致電400-021-8158了解更多詳細(xì)情況!

▲ Page Top

（3）抗體

AGO1抗體、單克隆抗體（1F2）
（50μL（產(chǎn)品編號：018-22401））〈用于蛋白質(zhì)印跡法〉
AGO1抗體、單克隆抗體（2A7）
（50μL（產(chǎn)品編號：015-22411））〈用于免疫沉淀法〉
抗人AGO2抗體、單克隆抗體（4G8）
（50μL（產(chǎn)品編號：011-22033）；100μL（產(chǎn)品編號：015-22031）
〈用于蛋白質(zhì)印跡法、免疫沉淀法以及免疫細(xì)胞化學(xué)染色法〉
抗小鼠AGO2抗體、單克隆抗體（2D4）
（50μL（產(chǎn)品編號：014-22023）；100μL（產(chǎn)品編號：018-22021）
〈用于蛋白質(zhì)印跡法、免疫沉淀法以及免疫細(xì)胞化學(xué)染色法〉
抗人AGO3抗體、單克隆抗體（1C12）
（50μL（產(chǎn)品編號：018-23241））〈用于免疫沉淀法〉

如果您對上述產(chǎn)品感興趣，請致電400-021-8158了解更多詳細(xì)情況!

▲ Page Top

2. piRNA研究

PIWIL1抗體、單克隆抗體（2C12）
(100 μL （產(chǎn)品編號：017-23451））〈用于免疫沉淀法〉

特點：

1) 可免疫沉淀內(nèi)在性PIWIL1蛋白質(zhì)。（5～10µg濃度為10%的蛋白G微珠）
2) 可免疫沉淀PIWI1結(jié)合piRNA。
3) 可在人、鼠的組織和細(xì)胞中使用。

使用例：

(1) 小鼠精巢中內(nèi)源性PIWIL1的免疫沉淀（IP)-1

Lane 1: NEC14 cells, mouse IgG IP分級 (1/2 vol.)
Lane 2: NEC14 cells, 2C12 IP分級 (1/2 vol.)
Lane 3：小鼠精巢 IgG IP分級 (1/2 vol.)
Lane 4：小鼠精巢, 2C12 IP分級 (1/2 vol.)

Cell number: 1 x 107 cells
組織（小鼠精巢）重量 25mg
第一抗體（蛋白質(zhì)印跡）
Anti PIWIL1 polyclonal antibody
(gifted from Dr. Miyagawa, Osaka Univ.)
This antibody is not available from Wako.

(2) 小鼠精巢中內(nèi)源性PIWIL1的免疫沉淀（IP)-2

Lane M：分子量Marker
Lane 1：小鼠IgG IP分級 (1/2 vol.)
Lane 2: 2C12 IP分級 (1/2 vol.)
組織（小鼠精巢）重量 25mg
第一抗體（蛋白質(zhì)印跡）
Anti PIWIL1 polyclonal antibody
(gifted from Dr. Miyagawa, Osaka Univ.)
This antibody is not available from Wako.

(3) PIWIL1結(jié)合piRNA的精制