• 什么是內毒素？
• 關于內毒素的檢測方法？
• 內毒素檢測用具的要求？

根據檢測目的使用適當類型的內毒素標準品。

•需符合BET（美國藥典/ 歐洲藥典 / 日本藥典）的檢測，例如藥品和醫療器械的產品終檢驗

→必須使用美國藥典，歐洲藥典或日本藥典標準的內毒素國家標準品。

•對材料，工藝流程和其他相關主題的檢測

→可以使用內毒素工作標準品（CSE）。

有時候需要采取預防措施，以防止樣本對內毒素檢測有潛在影響（反應干擾）。這些干擾分為以下兩種類型：

>•蛋白變性劑（例如酸，堿，尿素，表面活性劑，有機溶劑）

•蛋白酶和蛋白酶抑制劑

•螯合劑（會清除反應所需的鈣和鎂）

•對于比色法：著色物質（在約405 nm處具有相當大吸收的物質）

•對于比濁法：濁度

•金屬離子（例如鐵，鋁，鎵和鉻離子。即使微摩爾級別的存在也會對測試產生影響）

•表面活性劑

樣本的干擾效果可以通過進行藥典中的干擾因子測試來衡量：即通過對加標了已知量的內毒素的樣本進行檢測，獲得加標內毒素的回收率。如果回收率在50％至200％范圍內，則可以確定該樣本不會造成影響，換句話說，檢測所得的內毒素濃度是正確的。如果發現樣本會造成影響，可以通過對樣本溶液進行稀釋，從而減少對測試的影響。然而，對樣本溶液的稀釋會提高了由原始溶液（預稀釋溶液）的濃度轉換而得的內毒素濃度值。合理的稀釋倍數，是根據待檢測的內毒素的所需濃度以及所用LAL試劑的檢測靈敏度來確定的。

LAL試劑和內毒素的級聯反應機制如圖4所示。如果反應體系中存在（1→3）-β-D-葡聚糖*，會激活G因子，引起伴有凝膠化的假陽性反應。在這種情況下，無論體系中是否存在內毒素，都會發生反應，意味著無法對內毒素進行特異性檢測。為此，我們研發出Wako's Limulus ES，該產品通過在反應體系中加入過量共存的（1→3）-β-D-葡聚糖（羧甲基化凝膠多糖），從而來抑制（1→3）-β-D-葡聚糖的干擾。因此，β-葡聚糖對LAL試劑的活化受到抑制，從而使內毒素特異性檢測能夠進行。過量的β-葡聚糖可以抑制其自身反應的原理如圖5所示：β-葡聚糖和LAL試劑之間反應的濃度范圍對于整個反應而言很窄。另一方面，內毒素和鱟試劑的反應在很寬的濃度范圍內都會發生，并且不受大量共存的β-葡聚糖的任何干擾。Wako的LimulusES就是根據這個原理而制作的（見圖6）。

使用Toxinometer®（檢測時間設定為99 min）和Limulus HS進行檢測。

○：在99 min內檢測不到凝膠的生成

●：有凝膠的生成

A：Limulus HS

B：Limulus ES

○：內毒素的系列稀釋

▲：含有1 μg/mL羧甲基化凝膠多糖的內毒素系列稀釋