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N-glycan analysis Flowchart N-糖鏈的分析流程

來源:作者:人氣:-發表時間:2015-09-15 11:15:00【
西寶生物為Ludger中國區總代理,提供N-糖鏈分析等糖基化分析產品,包括:糖鏈釋放、多糖標記、純化柱等,客服熱線:400-021-8158。Ludger為解決現有2AA和2AB標記試劑的毒性作用,自主研發了無毒的、以2-甲基吡啶硼烷(2-PB)為還原劑的標記試劑盒,比之前更安全。
N-glycan analysis
第一步是酶解多糖釋放后用LC-EB10-A6純化,去除多余的蛋白; 其中可以使用PNGase F 酶【E-PNG01 & E-PNG05】進行酶解。
第二步進行標記(2-AB標記試劑盒或者Procainamide 標記試劑盒);可以分析24個樣品,此外還有可以分析96個樣品的包裝。
第三步 用 LC-S-A6 純化柱進行純化取出多余的標記試劑;一個set的柱子都是含有6根柱子。
第四步進行HPLC/UHPLC/MS/MALDI分析,其中需要用到多糖標準品,Ludger提供2-AB標記,2-AA標記,APTS標記和未標記的多糖分析用標準品,產品線比較齊全,滿足多糖分析標準品所需。
Ludger的分析方法和試劑/柱子是美國USP推薦使用品牌。
 
無毒的2-AB多糖標記試劑盒與原有2-AB和2-AA試劑盒區別 
其中第二步標記,我們有2-AB和2-AA 多糖標記試劑盒,以及無毒的2-AB 多糖標記試劑盒,此外還有Procainamide 標記試劑盒。下面是他們之間的區別:
資料顯示,有毒的2AA或2AB是歐美幾十年前使用的技術,近幾年專家證明有毒的2AA或2AB標記試劑可能影響女性的生育或影響將來所生寶寶的正常發育。因些,英國Ludger生物科技公司特意開發了無毒的2AA(貨號:LT-KAA-VP24)和2AB(貨號:LT-KAB-VP24)標記。這也是歐美國家目前使用較多的標記技術。
這兩個試劑盒Ludger很早以前就獲得專利。它們采用一種無毒的還原試劑----2-甲基吡啶硼烷(2-PB),比之前有毒性的氰基氫硼化鈉更安全。它們具有以下特點:
1、已通過ICHQ2(R1)認證,進行過β因素測試;
2、精確度高,相對峰面積超過5%,其CVs是少過5%;相對峰面積低于5%,其CVs是少過8%;
3、標記效果比現有有毒性的2-AA標記試劑盒和2-AB試劑盒要好;
4、試劑盒含有兩個預混合瓶,一瓶是醋酸和DMSO溶液,另一瓶是有2-PB的2-AB或者2-AA標記物,因此標記過程簡單。
5、2h內完成標記。
此外,Ludger較新的Procainamide Glycan Labeling Kit的敏感性更好,Ludger的科學家對標記效率進行了評估和測試以及改善反應條件使標記效率提高。
LC-ESI-MS分析普魯卡因胺標記的聚糖--敏感性遠高于2 AB標記的聚糖
Fluorescence
 
MS response of 2-AB labelled IgG and Fetuin glycans is a lot lower than that of procainamide labelled samples
Base Peak Chromatogram
 
Procainamide labelled samples reveal more minor peaks compare to 2-AB labelled samples
相比2 AB,普魯卡因胺標記具有以下特點:
● 與(U)HPLC和MS兼容;
● 提高低豐度寡糖的鑒定;
● 提高質譜離子化效率;
 使得用二級質譜(MS/MS)碎裂測定低豐度的寡糖組分的結構成為可能;
適合于用LC-MS分析普魯卡因胺標記的中性和唾液酸化多糖(使用LudgerTag普魯卡因胺標記試劑盒,貨號# LT-KPROC-24),它是一個可用于多糖的相對定性和定量分析的單一體系。它可用于以下:
1. 生物藥物,如:促紅細胞生成素,IgG等;
2. 生物樣品,如唾液酸;
3. O-glycan分析。
每個試劑盒有兩套試劑,每套有3個小瓶。每一個set可以做12個樣品,總共可以做24個樣品。從樣品處理開始,整個分析過程只需要1.5小時。
此外,還有V-Tag kit 針對IgG的糖肽的標記和富集試劑盒(可以直接對肽段進行分析),通過(U)HPLC或MALDI質譜分析分析。
 
上海西寶生物科技有限公司提供以下糖基釋放、標記、純化和分析用產品,
原裝進口,歡迎撥打咨詢熱線:400-021-8151
N-糖鏈分析用產品 
貨號
英文名稱
產品名稱
規格
PNGase F 酶-用于多糖的釋放
E-PNG01
PNGase F
 (Peptide N Glycosidase F) 
糖基肽酶
(N糖苷肽酶F)

0.3 Unit/60 μl

E-PNG05
PNGase F
 (Peptide N Glycosidase F)
糖基肽酶
(N糖苷肽酶F)

1 Unit/200 μl

E-rPNG01

Recombinant PNGase F 

重組糖基肽酶

0.3 Unit/60 μl

KE-DG01

Enzymatic CarboRelease Kit 

酶的糖釋放試劑盒
1Kit
KE-DGMX

Enzymatic DeGlycoMx Kit 

酶的糖釋放試劑盒
1Kit
LL-HYDRAZ-A2

Ludger Liberate Hydrazinolysis Kit

肼解釋放試劑盒
2 sets/Kit
LL-ORELA-A2

Ludger Liberate Orela Kit 

加速釋放試劑盒
2 sets/Kit
LL-MR-A2

Ludger Liberate Membrane Release kit 

膜釋放試劑盒
2 sets/Kit
標記試劑盒-用于多糖、單糖、唾液酸的標記
LT-KPROC-VP24

Procainamide Glycan Labeling Kit, 2PB reductant

普魯卡因胺多糖標記試劑盒, 2PB 還原劑
1Kit
LT-KAB-VP24

2-AB Glycan Labeling Kit, 2PB reductant 

2-AB 多糖標記試劑盒, 2PB 還原劑
2 sets/Kit
LT-KAA-VP24

2-AA Glycan Labeling Kit, 2PB reductant 

2-AA 多糖標記試劑盒, 2PB 還原劑
2 sets/Kit
LT-KAB-VP96

2-AB Glycan Labeling Kit, 2PB reductant 

2-AB 多糖標記試劑盒, 2PB 還原劑
1Kit
LT-KAA-VP96

2-AA Glycan Labeling Kit, 2PB reductant 

2-AA 多糖標記試劑盒, 2PB 還原劑
1Kit
LT-KAB-A2

2-AB Glycan Labeling Kit 

2-AB 多糖標記試劑盒 
2 sets/Kit
LT-KAA-A2

2-AA Glycan Labeling Kit 

2-AA 多糖標記試劑盒
2 sets/Kit
LT-KDMB-A1

DMB Sialic Acid Labeling Kit 

DMB 唾液酸釋放標記試劑盒
1 set/Kit
LT-MONO-96

2-AA Monosaccharide Release and Labeling Kit

2-AA單糖釋放、標記試劑盒
2 sets/Kit
純化柱-用于純化取出多余的標記試劑
LC-EB10-A6

LudgerClean EB10 Cartridges 

EB10 多糖純化柱

6 cartridges/Kit 

LC-S-A6

LudgerClean S Glycan Cleanup Cartridges

S 多糖純化柱

6 cartridges/Kit

LC-T1-A6

LudgerClean T1 Glycan Cleanup Cartridges 

T1 多糖純化柱

6 cartridges/Kit

分析柱/緩沖液-用于多糖分析
LS-N1-4.6x250

LudgerSep N1 amide  HPLC Columns  for Glycan Analysis

N1 HPLC 色譜柱 

4.6x250mm,5μm 

LS-N2-4.6x150

LudgerSep N2 High Resolution Amide HPLC Columns  for Glycan Analysis

N2 HPLC 色譜柱 

4.6x150mm,3μm 

LS-N2-2.0x150

LudgerSep N2 HPLC Column 

N2 HPLC 色譜柱 

2.0x150mm,3μm 

LS-N-BUFFX40

LudgerSep Ammonium Formate Buffer, pH 4.4

40倍甲酸銨溶液
 
LS-C2-4.6x50

LudgerSep C2 HPLC Column 

C2 HPLC 色譜柱 

4.6x50mm 

LS-C2-4.6x150

LudgerSep C2 HPLC Column 

C2 HPLC 色譜柱 

4.6x150mm 

LS-C3-7.5x75

LudgerSep C3 HPLC Column 

C3 HPLC 色譜柱 

7.5x75mm 

LS-C-BUFFX4

LudgerSep Ammonium Formate Buffer, pH 9

4倍甲酸銨緩沖
 
LS-R1-4.6x150

LudgerSep R1 HPLC Column 

R1 HPLC 色譜柱 

4.6x150mm 

LS-R2-4.6x150

LudgerSep R2 HPLC Column 

R2  HPLC 色譜柱 

4.6x150mm 

LS-UR2-2.1x50

LudgerSep uR2 UHPLC Column -monosaccharide

uR2 UHPLC 色譜柱-單糖

2.1x50mm 

LS-UR2-2.1x100

LudgerSep uR2 UHPLC Column –sialic acids

uR2 UHPLC 色譜柱-唾液酸

2.1x100mm 

LS-R-BPTX10

LudgerSep R BPT Solvent 

R BPT 溶劑
糖標準品-用于糖分析用標準品
未標記的多糖標準品
GCP-FET-05

Fetuin glycoprotein standard 

胎球糖蛋白標準品
500μg
GCP-FET-250U

Fetuin glycoprotein standard 

胎球糖蛋白標準品
250μg
GCP-FET-100U-X4

Fetuin glycoprotein standard 

胎球糖蛋白標準品
4x100μg
GCP-FET-50U-X4

Fetuin glycoprotein standard 

胎球糖蛋白標準品
4x50μg
GCP-IGG-50U

IgG glycoprotein standard 

IgG糖蛋白標準品
50μg
GCP-IGG-100U

IgG glycoprotein standard

IgG糖蛋白標準品
100μg
SA-MAB4

MAb 4 Glycan Reference Panel 

MAb 4 多糖參照組
10μg
SA-CORE1

Galactose-ß-(1-3)-GalNAc Glycan, O-linked

半乳糖-ß-(1-3)-n-乙酰半乳糖胺,O-linked
20μg
CLIBN-FETUIN-01

Fetuin N glycan library 

胎球N-多糖文庫
1EA
CLIBO-FETUIN-01

Fetuin O glycan library 

胎球O-多糖文庫
1EA
CLIBN-IGG-01

IgG N glycan library 

IgG N-多糖文庫
25μg
CM-NEUAC-01

N-Acetylneuraminic acid quantitative standard

N-乙酰神經氨酸定量標準品
 
CM-NEUGC-01

N-glycolyneuraminic acid quantitative standard 

N-乙二醇神經氨酸定量標準品
 
CM-NEU5,9,AC-01

N-acetylneuraminic acid qualitative standard 

N-乙酰神經氨酸定性標準品
 
CM-MONO-MIX-10

Mix of six monosaccharide quantitative standards  (glucosamine, galactosamine, galactose, mannose, glucose/dextrose and fucose ) 

6個單糖混標準品 (葡萄糖胺, 半乳糖胺,半乳糖, 甘露糖, 葡萄糖, 巖藻糖
 
CN-NA4-20U
NA4 Glycan 
NA4 多糖標準品
20μg
CN-NA4-10U
NA4 Glycan 
NA4 多糖標準品
10μg
CN-NGA4-20U
NGA4 Glycan 
NGA4 多糖標準品 
20μg
CN-NGA4-10U
NGA4 Glycan 
NGA4 多糖標準品 
10μg
CN-A3-20U
A3 Glycan 
A3 多糖標準品
20μg
CN-A3-10U
A3 Glycan 
A3 多糖標準品
10μg
CN-NA3-20U
NA3 Glycan 
NA3 多糖標準品
20μg
CN-NA3-10U
NA3 Glycan 
NA3 多糖標準品
10μg
CN-NGA3-20U
NGA3 Glycan
NGA3 多糖標準品
20μg
CN-NGA3-10U
NGA3 Glycan
NGA3 多糖標準品
10μg
CN-NA2F-20U
NA2F Glycan 
NA2F 多糖標準品 
20μg
CN-NA2F-10U
NA2F Glycan 
NA2F 多糖標準品
10μg
CN-A2F-20U
A2F Glycan 
A2F 多糖標準品 
20μg
CN-A2F-10U
A2F Glycan 
A2F 多糖標準品
10μg
CN-A1F-20U
A1F Glycan 
A1F 多糖標準品
20μg
CN-A1F-10U
A1F Glycan 
A1F 多糖標準品
10μg
CN-NGA2F-20U
NGA2F Glycan 
NGA2F 多糖標準品 
20μg
CN-NGA2F-10U
NGA2F Glycan 
NGA2F多糖標準品
10μg
CN-FA2G1-20U
G1F Glycan
G1F 多糖標準品
20μg
CN-FA2G1-10U
G1F Glycan
G1F 多糖標準品
10μg
CN-A2-20U
A2 Glycan 
A2 多糖標準品
20μg
CN-A2-10U
A2 Glycan 
A2 多糖標準品 
10μg
CN-A1-20U
A1 Glycan 
A1 多糖標準品 
20μg
CN-A1-10U
A1 Glycan 
A1 多糖標準品
10μg
CN-NA2-20U
NA2 Glycan 
NA2 多糖標準品
20μg
CN-NA2-10U
NA2 Glycan 
NA2 多糖標準品 
10μg
CN-NGA2-20U
NGA2 Glycan 
NGA2 多糖標準品
20μg
CN-NGA2-10U
NGA2 Glycan 
NGA2 多糖標準品
10μg
CN-M3N2-20U
M3N2 (Man-3) Glycan 
M3N2 (Man-3) 多糖標準品
20μg
CN-M3N2-10U
M3N2 (Man-3) Glycan 
M3N2(Man-3) 多糖標準品
10μg
CN-A2G1-20U
A2G1 Glycan 
A2G1 多糖標準品
20μg
CN-MAN9-20U
Man-9 Glycan
Man-9 多糖標準品
20μg
CN-MAN9-10U
Man-9 Glycan
Man-9 多糖標準品
10μg
CN-MAN8-20U
Man-8 Glycan
Man-8 多糖標準品
20μg
CN-MAN8-10U
Man-8 Glycan
Man-8 多糖標準品
10μg
CN-MAN7-20U
Man-7 Glycan
Man-7 多糖標準品
20μg
CN-MAN7-10U
Man-7 Glycan
Man-7 多糖標準品
10μg
CN-MAN6-20U
Man-6 Glycan
Man-6 多糖標準品
20μg
CN-MAN6-10U
Man-6 Glycan
Man-6 多糖標準品
10μg
CN-MAN5-20U
Man-5 Glycan
Man-5 多糖標準品
20μg
CN-MAN5-10U
Man-5 Glycan
Man-5 多糖標準品
10μg
CN-HYBRID-10U
Hybrid Glycan 
混合多糖標準品
10μg
CPM-IGG-01
N-glycan IgG library, permethylated
全甲基化的N-多糖免疫球蛋白文檔庫
1EA
CPM-C13-IGG-01
N-glycan IgG library, permethylated with heavy (13C) MeI
以C13全甲基化的N-多糖免疫球蛋白文檔庫
1EA
BQ-GPEP-A2G2S2
BioQuant A2G2S2 glycopeptide standard 
A2G2S2 糖肽標準品
10μg
2-AB標記的多糖標準品
CAB-IGG-01

IgG N glycan library, 2AB-labelled

IgG N-多糖文庫,2-AB標記
200pmol
CAB-ALPHAGAL-01
Gal alpha 1-3 Gal beta 1-4 GlcNAc, 2AB Labeled
半乳糖 alpha 1-3半乳糖 beta 1-4 N-乙酰葡萄糖胺標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-NA4-01
NA4 Glycan, 2-AB Labeled
NA4 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-NGA4-01
NGA4 Glycan, 2-AB Labeled
NGA4多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-A3-01
A3 Glycan, 2-AB Labeled
A3 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-NA3-01
NA3 Glycan, 2-AB Labeled
NA3 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-NGA3-01
NGA3 Glycan, 2-AB Labeled
NGA3 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-NA2F-01
NA2F Glycan, 2-AB Labeled
NA2F 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-A2F-01
A2F Glycan, 2-AB Labeled
A2F 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-A1F-01
A1F Glycan, 2-AB Labeled
A1F 多糖標準品, 2-AB標記
100pmol
CAB-NGA2F-01
NGA2F Glycan, 2-AB Labeled
NGA2F 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-FA2G1-01
G1F Glycan, 2-AB Labeled
G1F多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-FA2B-01
FA2B, 2AB Labeled 
FA2B多糖標準品, 2AB 標記
100pmol
CAB-FA2BG1-01
FA2BG1, 2AB Labeled 
FA2BG1多糖標準品, 2AB 標記
100pmol
CAB-A2-01
A2 Glycan, 2-AB Labeled
A2多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-A1-01
A1 Glycan, 2-AB Labeled
A1多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-NA2-01
NA2 Glycan, 2-AB Labeled
NA2多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-NGA2-01
NGA2 Glycan, 2-AB Labeled
NGA2 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-M3N2-01
M3N2 (Man-3) Glycan, 2-AB Labeled
M3N2(Man-3) 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-A2G1-01

A2G1 Glycan, 2AB Labeled 

A2G1 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-MAN9-01
Man-9 Glycan, 2-AB Labeled
Man-9多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-MAN8-01
Man-8 Glycan, 2-AB Labeled
Man-8 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-MAN7-01
Man-7 Glycan, 2-AB Labeled
Man-7 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-MAN6-01
Man-6 Glycan, 2-AB Labeled
Man-6 多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-MAN5-01
Man-5 Glycan, 2-AB Labeled
Man-5多糖標準品, 2-AB 標記
100pmol
CAB-HYBRID-01
Hybrid Glycan, 2-AB Labeled
混合多糖標準品, 2-AB標記
100pmol
CAB-GHP-30
2-AB Glucose Homopolymer Ladder 
2-AB標記 葡萄糖同聚物梯度
1EA
CAB-C1-01

2AB labelled core 1 O-glycan, C1

2-AB 標記 核心1 O-多糖, C1
100pmol
CAB-C1S(3)1-02

2AB labelled sialylated core 1 O glycan, C1S(3)1 

2-AB 標記 甲烷硅基化的核心1 O-多糖, C1S(3)1
50pmol
CAB-C2S(3,3)2-02

2AB labelled di-sialylated core 2 O glycan, C2S(3,3)2

2-AB 標記 未甲烷硅基化的核心2 O-多糖,  C2S(3,3)2
50pmol
2-AA標記的多糖標準品
CAA-ALPHAGAL-01
Gal alpha 1-3 Gal beta 1-4 GlcNAc, 2AA Labeled
半乳糖 alpha 1-3半乳糖 beta 1-4 N-乙酰葡萄糖胺標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-NA4-01
NA4 Glycan, 2-AA Labeled
NA4 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-NGA4-01
NGA4 Glycan, 2-AA Labeled
NGA4 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-A3-01
A3 Glycan, 2-AA Labeled
A3 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-NA3-01
NA3 Glycan, 2-AA Labeled
NA3 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-NGA3-01
NGA3 Glycan, 2-AA Labeled
NGA3 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-A2F-01
A2FGlycan, 2-AA Labeled
A2F 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-A1F-01
A1F Glycan, 2-AA Labeled
A1F多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-NA2F-01
NA2F Glycan, 2-AA Labeled
NA2F 多糖標準品, 2-AA標記
100pmol
CAA-NGA2F-01
NGA2F Glycan, 2-AA Labeled
NGA2F 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-FA2G1-01
G1F Glycan, 2-AA Labeled
G1F 多糖標準品, 2-AA標記
100pmol
CAA-FA2B-01
FA2B, 2AA Labeled 
FA2B標準品, 2-AA 標記
1EA
CAA-FA2BG1-01
FA2BG1, 2AA Labeled 
FA2BG1標準品, 2-AA 標記
1EA
CAA-A2-01
A2 Glycan, 2-AA Labeled
A2 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-A1-01
A1 Glycan, 2-AA Labeled
A1 多糖標準品, 2-AA標記
100pmol
CAA-NA2-01
NA2 Glycan, 2-AA Labeled
NA2多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-NGA2-01
NGA2 Glycan, 2-AA Labeled
NGA2 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-M3N2-01
M3N2 (Man-3) Glycan, 2-AA Labeled
M3N2 (Man-3) 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-A2G1-01

A2G1 Glycan, 2AA Labeled 

A2G1 多糖標準品, 2AA 標記
100pmol
CAA-MAN9-01
Man-9 Glycan, 2-AA Labeled
Man-9多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-MAN8-01
Man-8 Glycan, 2-AA Labeled
Man-8 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-MAN7-01
Man-7 Glycan, 2-AA Labeled
Man-7多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-MAN6-01
Man-6 Glycan, 2-AA Labeled
Man-6 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-MAN5-01
Man-5 Glycan, 2-AA Labeled
Man-5 多糖標準品, 2-AA 標記
100pmol
CAA-HYBRID-01
Hybrid Glycan, 2-AA Labeled
混合多糖標準品, 2-AA標記
100pmol
CAA-GHP-30
2-AA Glucose Homopolymer Ladder 
2-AA 葡萄糖同聚物梯度
1EA
APTS標記的多糖標準品
CAPTS-IGG-01

IgG glycoprotein, APTS labeled 

IgG 糖蛋白, APTS標記
10pmol
CAPTS-A2F-01
A2F Glycan,APTS Labeled
A2F 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-A1F-01

A1F Glycan, APTS Labeled 

A1F 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-NA2F-01

NA2F Glycan, APTS Labeled 

NA2F 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-NGA2F-01

NGA2F Glycan, APTS Labeled 

NGA2F 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-FA2G1-01

FA2G1 Glycan, APTS Labeled 

FA2G1 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-A2-01

A2 Glycan, APTS Labeled 

A2 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-A1-01

A1 Glycan, APTS Labeled 

A1 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-NA2-01

NA2 Glycan, APTS Labeled 

NA2 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-NGA2-01

NGA2 Glycan, APTS Labeled 

NGA2 多糖, APTS標記
20pmol
CAPTS-MAN5-01

MAN5 Glycan, APTS Labeled 

MAN5 多糖, APTS標記
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