NHS活化偶聯(lián)介質(zhì)——層析介質(zhì)優(yōu)選西寶生物

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2015-10-15 14:40:00【大中小】

NHS活化偶聯(lián)介質(zhì)可用于各種含有氨基的親和配基（蛋白質(zhì)、多肽、糖等）的偶聯(lián)，應用廣泛。西寶生物NHS-activated QZT 4FF活化偶聯(lián)介質(zhì)以自制的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，經(jīng)過一系列的活化、偶聯(lián)步驟，并形成活化酯，在溫和的條件下就可以偶聯(lián)各種帶氨基的配基。NHS-activated QZT 4FF活化偶聯(lián)介質(zhì)具有使用方便、偶聯(lián)條件溫和、偶聯(lián)效率高和應用范圍廣的特點。

一、產(chǎn)品特性

表1 NHS活化偶聯(lián)介質(zhì)的理化性質(zhì)和產(chǎn)品特性

基質(zhì)	4%交聯(lián)瓊脂糖凝膠
活化基團	NHS
形狀	球形
介質(zhì)平均粒徑	90 μm (45-165)
活化基團密度	18-25 μmol/mL wet gel
偶聯(lián)條件	pH 6-9, 4℃–室溫, 2-24 h
流速可高達（25℃）	450 cm/h
推薦流速	150 cm/h
耐壓可高達	0.3 MPa (3 bar)
保存	-20 ℃（100%異丙醇）

*：除4FF基質(zhì)外，也可以提供4B、6FF和6B基質(zhì)的NHS活化介質(zhì)。

二、應用范圍

西寶生物NHS-activated QZT 4FF活化偶聯(lián)介質(zhì)廣泛用于各種含有氨基的親和配基（蛋白質(zhì)、多肽、糖等）的偶聯(lián)。

三、操作步驟

具體的操作步驟如下（以4 mL活化膠偶聯(lián)BSA為例）：

清洗液：1 mM HCl，100 mL，4度預冷；偶聯(lián)緩沖液：0.2 M NaHCO₃+0.5 M NaCl，pH 8.3，50 mL。

準確稱取40 mg BSA溶于4.0 mL 0.2 M NaHCO₃+0.5 M NaCl，pH 8.3緩沖液，溶解完全后備用。
將約4 mL NHS活化膠用4度預冷的1 mM HCl洗3-5次后抽干，再用0.2 M NaHCO₃+0.5 M NaCl，pH 8.3清洗2次，抽干后將4 mL NHS活化膠（約3.0 g）加入到10 mL的反應器（磨口三角瓶或離心管）中（注意：清洗后應立即使用）。
將BSA溶液加入到活化膠中，反應溫度恒定在4℃（或室溫/25℃），搖床中振蕩混合（離心管水平放置），轉(zhuǎn)速120 rpm，反應過夜（或5h）。
反應停止后，靜置，取上清離心（3000 g，5 min，室溫），收集上清液用于未偶聯(lián)BSA的濃度分析（可采用Bradford、Lowry、BCA法，NHS 在280 nm有強吸收，不能采用OD280測定蛋白濃度），計算偶聯(lián)的BSA的配基密度；將其余料液轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中用去離子水清洗、抽干。
封閉未反應的NHS：將4 ml抽干的BSA親和膠加入到25ml磨口三角瓶中，加入9 ml 0.5 mol/L乙醇胺+0.5 M NaCl，pH 8.3溶液（或0.1 mol/LTris-HCl，pH 8.3）。反應溫度恒定在4℃（或室溫/25℃），攪拌速度120 rpm，反應過夜（或5 h）。反應停止后將料液轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干，用去離子水清洗。
清洗：將制得的BSA瓊脂糖凝膠依次用5倍的去離子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH 4.0）、去離子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液（pH 8.0）和去離子水充分洗滌（重復交替清洗3次），抽干，去除未反應的配基。
保存：制得的BSA親和介質(zhì)保存于4℃、20%乙醇溶液中。

備注：其他配基的偶聯(lián)方法與BSA類似，但反應條件（pH、溫度、時間、配基加入量）需要根據(jù)配基的特性和應用的需求進行適當調(diào)整。

注意事項：偶聯(lián)緩沖液可用碳酸鹽和磷酸鹽等緩沖液，但不能使用含有氨基的Tris等緩沖液。

四、特色服務(wù)

（1）提供介質(zhì)篩選及工藝開發(fā)的咨詢。

（2）接受客戶委托開發(fā)各種分離介質(zhì)和分離工藝。

（3）按客戶要求提供各種規(guī)格的預裝柱。

（4）為客戶提供專業(yè)的售前和售后服務(wù)。

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