蛋白質(zhì)生產(chǎn)培養(yǎng)工序中氨基酸的監(jiān)測(cè)

來(lái)源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2016-01-20 14:31:00【大中小】

在蛋白質(zhì)生產(chǎn)培養(yǎng)的工序中，培養(yǎng)液中的氨基酸是重要的營(yíng)養(yǎng)源，對(duì)在不同溶氧量、PH值、溫度下培養(yǎng)液中的各種氨基酸濃度進(jìn)行監(jiān)測(cè)和控制至關(guān)重要。日立氨基酸分析儀(Hitachi)能夠進(jìn)行多成分同步分析的定量精度氨基酸，以其高分離度而著稱(chēng)，在國(guó)內(nèi)應(yīng)用較為普遍。西寶生物提供全自動(dòng)氨基酸分析儀相配套的耗材、緩沖液和顯色劑等相關(guān)試劑，歡迎致電400-021-8158。

■ 生物藥品的研發(fā)流程

(※)實(shí)施培養(yǎng)液氨基酸監(jiān)測(cè)的工序

■ 氨基酸監(jiān)測(cè)的樣品和色譜條件

＜生理體液分析法色譜條件＞

L-8900全自動(dòng)氨基酸分析儀

色譜柱	855-4506 4.6mmI.D.×60mm	柱溫	32～70℃
保護(hù)柱	855-3643 4.0mmI.D.×5mm	反應(yīng)液流速	0.3mL/min
脫氨柱	855-3523 4.6mmI.D.×40mm	反應(yīng)溫度	135℃
流動(dòng)相	605-07471 PF Buffer Kit	檢測(cè)波長(zhǎng)	VIS 570nm、440nm
反應(yīng)液	299-70501 Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI	進(jìn)樣量	20μL
反應(yīng)液	299-70501 Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI	流速	0.35mL/min

＜樣品＞

＜預(yù)處理＞


細(xì)胞	CHO細(xì)胞(CRL-9606)
培養(yǎng)槽	1L
通風(fēng)	僅液面通風(fēng)(Air、O2、N2、CO2的混合氣體)
培養(yǎng)基	Ham's F12 + 10% FBS

培養(yǎng)液與濃度5%的三氯乙酸溶液以1:1混合
↓
離心分離	10,000rpm,10min
↓
過(guò)濾	Pore Size 0.2μm
↓
分析用樣品

在以下條件的培養(yǎng)過(guò)程中，定時(shí)采樣，進(jìn)行了分析。

	培養(yǎng)不足1日	培養(yǎng)1日后
培養(yǎng)條件A	標(biāo)準(zhǔn)溶氧濃度	標(biāo)準(zhǔn)溶氧濃度
培養(yǎng)條件B	標(biāo)準(zhǔn)溶氧濃度	低溶氧濃度

■ 培養(yǎng)液中的氨基酸測(cè)定例

基于生理體液分析法的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定例(2nmol/20μL)

(但部分氨基酸為1nmol/20μL～40nmol/20μL)

培養(yǎng)液中的氨基酸測(cè)定例

■ 不同培養(yǎng)條件下氨基酸隨時(shí)間的變化

* 標(biāo)準(zhǔn)樣品的測(cè)定中，此次介紹的氨基酸中，Thr、Gly、Ala的峰保留時(shí)間的重現(xiàn)性為RSD=0.05～0.07%，峰面積的重現(xiàn)性為RSD=0.15～0.19%，得以確認(rèn)茚三酮柱后衍生法的高度重現(xiàn)性。(均為n=3)(產(chǎn)品規(guī)格如下。峰保留時(shí)間的重現(xiàn)性：0.5%以內(nèi)(Ala)、0.3%以內(nèi)(Arg)；峰面積的重現(xiàn)性：1.5%以內(nèi)(Gly、His)

* 通過(guò)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)液中各種氨基酸的濃度，可獲知培養(yǎng)過(guò)程中各成分的盈缺，因此有助于探討最佳培養(yǎng)液組成。另外，基于培養(yǎng)條件的不同，可見(jiàn)氨基酸含量的變化出現(xiàn)差異的成分。可以認(rèn)為這反映出細(xì)胞內(nèi)的處理過(guò)程已發(fā)生變化，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)也可能不同，因此培養(yǎng)液中氨基酸的同步監(jiān)測(cè)可作為抗體藥物生產(chǎn)領(lǐng)域中生產(chǎn)管理的有效指標(biāo)之一。

注意：本資料所示數(shù)據(jù)僅為測(cè)定例用數(shù)據(jù)而非可保證儀器性能的數(shù)據(jù)。儀器只是研究用儀器，而不是診斷、治療或預(yù)防人或動(dòng)物疾病的醫(yī)療儀器。

■ 參考文章

1.日立氨基酸分析儀配套試劑解決方案

2.我國(guó)食品行業(yè)氨基酸的測(cè)定方法簡(jiǎn)介