如何讓細胞乖乖的
為了較好地保存細胞原有的細胞特性,或者較長的保存種質資源，實驗人員往往用特殊配置的細胞凍存液(常用的DMSO)將細胞保存于-196℃的液氮，使得細胞暫時脫離生長狀態，等到實驗需要的時候再從液氮中取出復蘇應用。科幻電影中將凍存若干年的生命體重新解凍復活的情節在生命科學研究過程中每一天都在上演。在這一看似神奇的生命存儲過程是如何實現的呢？
其實，細胞凍存和復蘇的教科書和實驗手冊上面都有。小編這里主要談談應該注意的一些事項和技巧，大部分都是干貨喲。
1、冷凍越慢越好，復蘇越快越好
高大上的實驗室可以使用程序冷凍儀。一切由機器代勞。普通實驗室就只好用人肉程序冷凍儀。具體的protocol，到處都有。小編想提醒大家的是，細胞冷凍越慢越好，寧慢勿快。做細胞冷凍前，事先留出充足的時間。
而復蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來之后，迅速放在37°C水浴中，然后使勁搖呀搖。令其盡快融化。
2、高高興興上班，平平安安回家
細胞凍存和復蘇是細胞培養技術里面容易出事的部分。凡是和液氮接觸的操作，注意戴保護眼鏡和手套。需要小心的是：復蘇的時候，在水浴中搖呀搖的時候。有時候小瓶會爆炸的。所以，一定要戴保護眼鏡和手套。不多說了，說多了滿眼都是淚。還有，一般的凍存液中的DMSO是有毒致癌的，接觸的時候一定一定要帶好手套。DMSO,小編建議西寶生物的133050，進口品牌建議SIGMA的D2650以及WAKO的031-24051
3、凍存細胞數量要足夠
無論再怎么小心，細胞在冷凍和復蘇過程中總會死掉一批的。所以，一開始凍存細胞的數量要足夠。一般要達到5×106/毫升，一瓶不夠兩瓶湊。但是，這個不能一概而論。有些細胞，比如雜交瘤細胞，只需要1-3x106/毫升。
4、做好標記
把培養瓶放入提手，末端應該扎有小牌，注明主人的名字，細胞名稱和凍存日期。還要在每個凍存管上寫上細胞名稱，代數和凍存日期。
實驗室的液氮罐都是公用的。每個人應該有屬于自己的提手。小編當年就發生過為了找自己的細胞，被迫把整個液氮罐翻了個底朝天的慘劇。
5、細心呵護
剛剛復蘇的細胞就象剛剛出生的baby，很脆弱。需要我們的細心呵護。培養液要事先在培養箱或者水浴中復溫。一切的和細胞接觸的動作都要輕柔。把細胞從凍存管里吸出來，注入離心管，要輕輕地吸取和滴加。包括給離心管補加培養液的時候，都要輕輕地滴加。離心要用低速離心（500-1000轉/分鐘）。吹打要用專用的吹打管，而不要圖方便用移液槍，吹打也要輕輕的。
6、DMSO的問題
上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質。那么，解凍之后，應不應該去除凍存液中的DMSO呢？答案是no。除了極少數特別注明的對DMSO敏感的細胞外，99%的細胞都不需要去除DMSO。解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的。當然了，如果你買的是無毒凍存液，就不存在這個問題啦。
7、物離鄉貴，人離鄉賤
解凍后的細胞要用和以前一樣的培養基和血清，培養基的選擇很重要，目前國內血清市場假貨泛濫。因為每一種細胞都有自己特定的，并且已經熟悉了的生長環境。突然使用不一樣的培養基和血清，會造成細胞生長不良，甚至死亡。這和一個人突然離家千里，會水土不服是一樣的道理。
細胞培養是個苦活，根本離不開人。小編還記得當年當實驗狗的時候，放個長假都要惦記著培養箱里面的細胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復蘇的技術，就可以解決這個問題。春節回家前把細胞都凍上，過了年回來再開干。
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