Seebio(R) Reverse Transcriptase逆轉(zhuǎn)錄酶

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2021-12-27 09:34:00【大中小】

“逆轉(zhuǎn)錄”是指，在生物學(xué)中以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成。此過程中，核酸合成與轉(zhuǎn)錄（DNA到RNA）過程與遺傳信息的流動方向（RNA到DNA）相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄過程是RNA病毒的復(fù)制形式之一，在逆轉(zhuǎn)錄的過程中需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。故而逆轉(zhuǎn)錄酶在RNA逆轉(zhuǎn)錄的過程中起著不可或缺的作用。

簡要過程如下：

逆轉(zhuǎn)錄酶的作用是以dNTP為底物，以RNA為模板，tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)為引物，在tRNA3'-末端上，按5'→3'方向，合成一條與RNA模板互補(bǔ)的cDNA單鏈，它與RNA模板形成RNA-cDNA雜交體。隨后又在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，水解掉RNA鏈，再以cDNA為模板合成第二條DNA鏈。至此，完成由RNA指導(dǎo)的DNA合成過程。

應(yīng)用背景：

逆轉(zhuǎn)錄在分子生物領(lǐng)域已有很廣泛的應(yīng)用，比如逆轉(zhuǎn)錄，主要是提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以RNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA鏈為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而獲得大量拷貝。逆轉(zhuǎn)錄PCR的出現(xiàn)使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。這在體外診斷領(lǐng)域大大提高了疾病的檢測診斷效率。

臨床應(yīng)用：

逆轉(zhuǎn)錄PCR可用于分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、檢測細(xì)胞中RNA病毒的含量、合成cDNA探針、直接克隆特定基因的cDNA序列等。如在臨床上RT-PCR可以用于遺傳病診斷、癌癥檢測、檢測病人標(biāo)本中的RNA病毒，如HAV、HCR、HIV等。

西寶生物致力于開發(fā)高品質(zhì)的體外診斷原材料，潛心研發(fā)，專注品質(zhì)，我們開發(fā)出了一種新型逆轉(zhuǎn)錄酶，Seebio®Reverse Transcriptase”是Seebio®逆轉(zhuǎn)錄酶家族中一個全新的成員，詳情可咨詢400-021-8148！

截止目前市場上逆轉(zhuǎn)錄酶數(shù)不勝數(shù)，很多逆轉(zhuǎn)錄酶能夠在基本性能上滿足科學(xué)家在研發(fā)過程中的使用比如（擴(kuò)增長度、靈敏度、可重復(fù)性、產(chǎn)量），但當(dāng)存在抑制劑、RNA被降解、樣本制備困難的時候、實(shí)際使用就會低于預(yù)期效果，這時Seebio®Reverse Transcriptase逆轉(zhuǎn)錄酶就表現(xiàn)出了非同一般的效果。西寶生物系列逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品，與市面上其他逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品相比，擁有更高的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度，cDNA產(chǎn)量更高，具有更完整的基因代表性。

產(chǎn)品概述

Seebio®逆轉(zhuǎn)錄酶是一種大腸桿菌重組表達(dá)的鼠白血病逆轉(zhuǎn)錄酶，是一款全新的高效逆轉(zhuǎn)錄酶，可進(jìn)行高效率的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。對于復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50~55℃，避免RNA復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)對cDNA合成的抑制，可有效合成高質(zhì)量的cDNA。除此之外，本產(chǎn)品具有優(yōu)越的持續(xù)合成能力和強(qiáng)的雜質(zhì)耐受度。可提供更高的全長cDNA產(chǎn)量，具有更完整的基因表現(xiàn)性。產(chǎn)品咨詢：400-021-8158！

產(chǎn)品優(yōu)勢

1)逆轉(zhuǎn)錄效率高、產(chǎn)量優(yōu)異：缺失了RNA酶H活性，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性，具有卓越的逆轉(zhuǎn)錄效率，可提供較普通逆轉(zhuǎn)錄酶更高的全長cDNA產(chǎn)量；
2)耐熱性及穩(wěn)定性強(qiáng)：逆轉(zhuǎn)錄酶耐受高溫的能力是cDNA合成的重要影響因素，Seebio逆轉(zhuǎn)錄酶在50-55℃下具有更高的熱穩(wěn)定性和更長的半衰期；
3)適用性廣兼容性好：可兼容動物、植物、病毒等多種模板；
4)雜質(zhì)耐受度強(qiáng)：對于常見雜質(zhì)（乙醇、異丙醇、水平衡酚、異硫氰酸胍、腐殖酸）均具有強(qiáng)的耐受度。

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品	組分	產(chǎn)品編號	訂購規(guī)格
Seebio® Reverse Transcriptase	Seebio® Reverse Transcriptase（200U/μl） Seebio® dNTP Mixture 5× RT Buffer RNase-free ddH2O	DAA0309B	2KU 10KU 4*10KU

保存條件

-30~-15℃儲存。于-20~0℃運(yùn)輸。

單位定義

以Poly (rA)·Oligo (dT)為模板/引物，在37℃，10 min條件下，摻入1 nmol的dTTP為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個活性單位 (U)。

產(chǎn)品應(yīng)用

總RNA或者mRNA合成cDNA第一鏈，合成的cDNA第一條鏈后續(xù)可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二條鏈的合成等。

注意事項(xiàng)

防止RNase污染：請保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用的離心管、槍頭等耗材均需保證RNase-free。

功能檢測

逆轉(zhuǎn)錄體系中加入200U本酶，以1pg 293細(xì)胞總RNA為模板，Oligo(dT)20為引物，42℃反應(yīng)15min。取1/10 cDNA產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增GAPDH基因。瓊脂糖凝膠電泳，可見有單一的550bp條帶。

耐熱檢測

溫度對普通逆轉(zhuǎn)錄具有顯著影響，反應(yīng)溫度由42℃升至52℃，MMLV-RTs效果明顯變差，C(t) 值由18升至25，但對于Seebio-RTs的影響不顯著， C(t)值未發(fā)生顯著改變。

西寶生物可提供各種分子診斷酶產(chǎn)品，均可定制大包裝，詳情咨詢西寶生物400-021-8158！或者聯(lián)系我司診斷團(tuán)隊(duì)。

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