羧基活化偶聯介質——層析介質優選西寶生物

來源：作者：人氣：-發表時間：2015-10-15 15:31:00【大中小】

羧基活化偶聯介質可用于各種含有氨基的親和配基（蛋白質、多肽、糖等）的偶聯，應用十分廣泛。西寶生物ECH-activated QZT 4FF活化偶聯介質以自制的瓊脂糖凝膠為基質，經過一系列的活化步驟，并形成活化羧基，在溫和的條件下就可以偶聯各種帶氨基的配基。EAH-activated QZT 4FF活化偶聯介質具有使用方便、偶聯條件溫和、偶聯效率高和應用范圍廣的特點。

一、產品特性

羧基活化偶聯介質的理化性質和產品特性如表1所示。

表1 羧基活化偶聯介質的理化性質和產品特性

參數	指標
基質	4%交聯瓊脂糖凝膠
活化基團	羧基
形狀	球形
介質平均粒徑	90 μm (45-165)
活化基團密度	12-18 μmol /ml wet gel
偶聯條件	pH 4.5, 4^oC–室溫, 2-24h
流速高達（25℃）	450 cm/h
推薦流速	150 cm/h
耐壓高達	0.3 MPa (3 bar)
保存	-20 ^oC（100%異丙醇）

*：除4FF基質外，也可以提供4B、6FF和6B基質的羧基活化介質。

二、應用范圍

西寶生物ECH-activated QZT 4FF活化偶聯介質廣泛用于各種含有氨基的親和配基（蛋白質、多肽、糖等）的偶聯。

三、操作步驟

具體的操作步驟如下（以4mL活化膠偶聯BSA為例）：

將約4 mL ECH活化膠水洗3-5次后抽干，再用稀HCL，pH 4.5溶液清洗2次，抽干后將4 mL ECH活化膠（約3.0 g）加入到10 mL的反應器（磨口三角瓶或離心管）中，備用。
準確稱取40 mg BSA溶于4.0 mL稀HCl, pH 4.5溶液，溶解完全后加入84 mg EDC.HCl，溶解完全后測量其pH是否為4.5，否則需調到4.5，備用。
將BSA溶液加入到活化膠中，反應溫度恒定在4℃或25℃，搖床中振蕩混合（離心管水平放置），轉速120 rpm，反應時間24 h（反應前1小時pH有明顯的下降，可在15、30、45、60 min時測量pH并加入適量稀NaOH 調pH至4.5）。
反應停止后，靜置，取上清離心（3000 g，5 min，室溫），收集上清液用于未偶聯BSA的濃度分析，計算偶聯的BSA的配基密度；將其余料液轉移到砂芯漏斗中用去離子水清洗、抽干。
封閉未反應的ECH：一般不需要封閉，如需封閉未反應的羧基，可在偶聯反應后（注意是在清洗前）直接往反應物中加入4.2 mL 1 M 氨基葡萄糖或乙醇胺，繼續反應4h。反應停止后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干，用去離子水清洗。
清洗：將制得的BSA瓊脂糖凝膠依次用5倍的去離子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH 4.0）、去離子水、0.1M含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液（pH 8.0）和去離子水充分洗滌（重復清洗3次），抽干，去除未反應的配基。
保存：制得的BSA親和介質保存于4℃、20%乙醇溶液中。

備注：其他配基的偶聯方法與BSA類似，但反應條件（溫度（4 ℃至室溫）、時間（4-24 h）、配基加入量）需要根據配基的特性和應用的需求進行適當調整。

注意事項：通常用稀鹽酸作為偶聯溶液，如果選用緩沖液要避免使用含有氨基、羧基、磷酸基的緩沖液。

四、特色服務

（1）提供介質篩選及工藝開發的咨詢。

（2）接受客戶委托開發各種分離介質和分離工藝。

（3）按客戶要求提供各種規格的預裝柱。

（4）為客戶提供專業的售前和售后服務。

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