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TRITC標記葡聚糖

來源：作者：人氣：-發表時間：2020-07-16 15:40:00【大中小】

TRITC標記葡聚糖

化學名稱： Dextran (3´6´tetramethylamino dihydroxy-3oxospiro(isobenzofuran-1(3H),(9H) xanthen)-5(or 6)-yl)carbamothioate

TRITC標記葡聚糖是由特定分子量的葡聚糖和四甲基羅丹明B異硫氰酸酯（異構混合物）結合而成，方法如de Belder和Granath（1）所述。TRITC標記葡聚糖的熒光強度隨pH變化較FITC標記葡聚糖要小得多。

檢測所有批次的分子量，取代度，干燥失重和游離TRITC。TdB提供分子量4 kDa到2000 kDa的TRITC標記葡聚糖。TRITC標記葡聚糖為粉色粉末。

結構與性質

葡聚糖是來源于腸系膜白串珠菌的帶支鏈多糖，本質上是一種α-(1-6)鏈接的線性葡萄糖鏈。支鏈比例大約是5%。

特定分子量的TRITC標記葡聚糖是由天然的葡聚糖B512F通過四甲基羅丹明B標記合成，方法如de Belder和Granath（1）所述。羅丹明部分是通過穩定的硫氨甲酰鍵鏈接，且標記過程不會導致葡聚糖解聚。TRITC標記葡聚糖含0.001到0.008 mol TRITC每個葡萄糖單元，低取代度使葡聚糖電荷極小，這也是滲透性研究基本的要求。

TRITC標記葡聚糖是紅色粉末，可溶于水和鹽溶液形成紅色溶液。該產品也可溶于二甲亞砜、甲酰胺和特定極性有機溶劑，但是不溶于低分子量脂肪醇，丙酮，氯仿和二甲基甲酰胺。

圖 1 TRITC標記葡聚糖分子結構示意圖

光譜數據

較佳激發波長為550nm，熒光檢測在572 nm (參圖2)。TdB實驗室的研究表明TRITC標記葡聚糖溶液的熒光在pH3-9范圍內隨pH降低僅略微增強 (參見圖3)。類似結果早前也見諸報道(2)。在進行定量檢測時這一點十分有意義。生物介質測量會顯著影響熒光強度，或者增強，或者衰減。

圖 2 pH9.0時 TRITC標記葡聚糖 40 在0.025M 硼酸鹽溶液 (9.9 mg溶于50 ml緩沖液)的熒光圖譜

圖2. TRITC標記葡聚糖在pH為9.0的0.025M的硼酸鹽緩沖液中（12mg溶于50毫升緩沖液）的熒光吸收圖譜，
激發波長552nm，發射波長576nm。

圖 3 pH4-9范圍內TRITC標記葡聚糖的熒光與pH的依賴性

物理化學性質

分子量超過5000Da的葡聚糖在溶液中呈有彈性的線圈狀。表1（下表）顯示了不同分子量下的分子尺寸。

表 1. 以斯托克半徑 (Å)表征的葡聚糖分子尺寸

葡聚糖和TRITC標記葡聚糖表現出牛頓流動特性，例如粘度與剪切速率無關。研究表明在pH 4-10范圍內粘度與pH無關。不同濃度的葡聚糖組分的粘度如圖4所示。

圖4. 不同葡聚糖組分粘度與濃度不相關

儲存和穩定性

TRITC標記葡聚糖的穩定性尚未進行過詳細研究，但推測與FITC標記葡聚糖相似（見數據文件）。僅在pH值升高（<9）和溫度升高時，才有硫氨甲酰鍵水解的風險。更多詳細信息，請參閱FITC標記葡聚糖的數據。

室溫下儲存在干燥密閉的容器中，TRITC標記葡聚糖可穩定保存6年。

毒性

毒性模式與母體葡聚糖相似。臨床上，葡聚糖作為血漿增溶劑使用已經超過50年。人體臨床上注射葡聚糖溶液后后，觀察到葡聚糖誘導的類過敏反應（DIARs）(3, 4)。反應癥狀從輕微的皮膚反應到嚴重的休克狀態。嚴重反應的發生率約為每2000人1例。TRITC標記葡聚糖也可能出現這種情況，但少有實驗動物出現問題的報告。

應用

TRITC標記葡聚糖主要用于研究細胞和組織的滲透性和傳導轉運（5）。額外的好處是通過測量熒光可提供相關健康和病變組織傳導和滲透性的定量數據。該項研究可以通過活體體內熒光顯微鏡實時進行。該技術靈敏度高，可在組織液中檢測到低至1µg/ml的濃度。與FITC葡聚糖不同，TRITC標記葡聚糖的熒光對于pH4-9范圍內的pH變化不敏感。另一個重要特性是TRITC標記葡聚糖不與動脈壁結合（6,7）。

常規過程

倉鼠頰囊的微血管構筑已被證明是一個研究血漿滲漏有用的模型，例如缺血/再灌注后，暴露于炎癥介質（8-10）。利用這項技術，可以實時研究血管滲透性，并與其他微血管事件相關聯，例如白細胞粘附和活化。使用合適的濾光片，通過活體熒光顯微鏡檢查面頰囊，并用數碼相機拍攝圖像（見圖5）。例如使用5%TRITC標記葡聚糖150溶液（約100mg/公斤體重）。

圖5 組胺激發試驗15分鐘后將TRITC標記葡聚糖 150注射入倉鼠頰囊 (感謝E. Svensjö 授權使用)

另一種使用兔耳腔的替代方法已發表。用再生鈦耳腔（家兔）和熒光標記葡聚糖，研究血液/淋巴系統的微循環。移植后4-8周可見淋巴生長（11）。

Thorball（5）報道了利用組合熒光立體顯微鏡進行的滲透性研究。大量FITC標記葡聚糖參與的組織固定技術研究已經發表，同時也與TRITC標記葡聚糖研究對應。顯微鏡設置（濾光片，照明）的細節可以在本文中找到。Mullick和他的同事描述了一種使用TRITC標記葡聚糖4對內皮層通透性進行序列定量的新方法。灌流液中TD4含量為42μg/ml（12）。

細胞滲透性研究

研究了FITC和TRITC標記葡聚糖在小鼠巨噬細胞溶菌體中的亞細胞熒光。比較這些值可以估計細胞內pH值。培養物在1 mg/ml葡聚糖濃度下培養（13）。

其他研究使用熒光探針描述了活細胞中的質子積累（14）。腸細胞407對TRITC標記葡聚糖10的吸收反應已有報道（15）。TRITC標記葡聚糖10（5mg/ml）也被用作流動相標記物（16）。TRITC標記葡聚糖4用于具屏障功能的前列腺癌細胞培養（17）。

Mairhofer和同事用TRITC標記葡聚糖4研究了SLP-1在核周體中的晚期內質定位（18）。在跨細胞蛋白質傳遞的研究中，使用TRITC標記葡聚糖10（0.1mg/ml）來檢測反式-激活劑融合的內化作用的動力學（19）。

動脈和微血管系統的滲透性研究

TRITC標記葡聚糖4和70用于研究葉酸缺乏癥大鼠頸動脈的通透性，注射濃度為42μg/ml（21）。TRITC標記葡聚糖在某些潛在治療中被證明有用（22-24）。

產品列表

產品編號	品名	分子量(kDa)	包裝
TD4-100mg	TRITC-dextran 4	4	100 mg
TD4-1g			1 g
TD20-100mg	TRITC-dextran 20	20	100 mg
TD20-1g			1 g
TD40-100mg	TRITC-dextran 40	40	100 mg
TD40-1g			1 g
TD70-100mg	TRITC-dextran 70	70	100 mg
TD70-1g			1 g
TD150-100mg	TRITC-dextran 150	150	100 mg
TD150-1g			1 g
TD500-100mg	TRITC-dextran 500	500	100 mg
TD500-1g			1 g
TD2000-100mg	TRICT-dextran 2000	2000	100 mg
TD2000-1g			1 g

參考文獻

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