1、酶法檢測(cè)糖化血紅蛋白 

糖化血紅蛋白(HbA1c)是目前糖尿病(DM)實(shí)驗(yàn)診斷方法中常用的血糖監(jiān)控指標(biāo), 它主要反映患者近2～3個(gè)月血糖控制的總體水平，自上世紀(jì)70年代以來(lái)已廣泛的應(yīng)用于DM診療的各個(gè)方面。糖化血紅蛋白的臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法則已從初期的電泳法、色譜法等發(fā)展到如今的免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光法和酶法。近兩年應(yīng)用酶法測(cè)定糖化血紅蛋白在各實(shí)驗(yàn)室相繼展開(kāi)，直接酶法具有良好精密度及準(zhǔn)確度，不易 受其他因素干擾，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，方法簡(jiǎn)便易行。

檢測(cè)原理：特殊蛋白酶分解血紅蛋白（Hemoglobin, Hb），3-5分鐘內(nèi)果糖基氨基酸從Hb分離，后經(jīng)果糖基氨基酸氧化酶(Fructosaminase, FAOD)產(chǎn)生H₂O₂，H₂O₂與POD與色原N-(羧甲基氨羰基)-4，4'-二甲氨基二苯胺鈉鹽(DA-64)反應(yīng)，在751nm測(cè)吸光度改變。

2、CNP-NAG 應(yīng)用于腎損傷早期檢測(cè)

N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG-ase）在尿中活性的測(cè)定，在臨床上應(yīng)用已有20多年的歷史。實(shí)踐證明，它是能早期發(fā)現(xiàn)腎臟損害的尿酶。 尿中此酶主要來(lái)自腎近曲小管上皮細(xì)胞，分子量約130-140kd，尿中NAG-ase活性升高，除前列腺炎和精液混入外，是各種腎實(shí)質(zhì)早期損傷的敏感標(biāo) 志物。參閱20多年來(lái)中外文獻(xiàn)，測(cè)定NAG-ase可以提供許多重要的臨床信息。

NAG(EC3.2.1.30)是一種溶酶體酶，廣泛分布于人體各組織中，但在前列腺和腎臟近端腎小管中含量高。NAG分子量約為130-140kd， 在正常情況下，血清中NAG不能通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)從尿中排泄。尿中NAG活性升高，除前列腺炎和精液混入外，常是腎臟損害的標(biāo)志。尿液NAG總活性及其同工 酶是目前臨床上常用的測(cè)定指標(biāo)。

檢測(cè)原理：樣品中的NAG作用于底物2-氯-4-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷(CNP-NAG)，水解游離出CNP，其生成速度與樣品中酶活 性在一定范圍內(nèi)成正比，可在400-405nm測(cè)定每分鐘吸光度的變化（△A/分），計(jì)算NAG的活性。由于色團(tuán)的pKa為5.5，與NAG-ase的較適反應(yīng)pH4.8接近，可在反應(yīng)條件下直接顯色，無(wú)需再行堿化，具備了速率法測(cè)定的條件。
（1）、性質(zhì)穩(wěn)定，干粉可長(zhǎng)期保存，制成工作液，條件合適也可穩(wěn)定至少一周
（2）、操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，無(wú)需逐個(gè)測(cè)樣品空白，也不必堿化呈色
（3）、有足夠的靈敏度，可支持臨床檢出其相應(yīng)的目標(biāo)物。
（4）、有較高的準(zhǔn)確性和精密度。

3、CNP-AFU和M-G-CNP-AFU應(yīng)用于原發(fā)性肝癌檢測(cè)

原發(fā)性肝癌（PHC）是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，是一種惡性程度高、進(jìn)展快、預(yù)后差、侵襲性強(qiáng)的惡性腫瘤，其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中列第3位，僅次于 胃癌和食管癌。早診斷、早治，是延長(zhǎng)生存期、降低死亡率的關(guān)鍵。甲胎蛋白（AFP）是診斷PHC的重要指標(biāo)，但30%～40%的PHC患者AFP陰性， 因此尋找更特異、敏感的腫瘤標(biāo)志物和診斷方法是研究肝癌的重要課題。

α-L-巖藻糖苷酶(α-L-Fucosidase, AFU)是一種溶酶體酸性水解酶，存在于人體肝、胰、腦、肺、腎纖維細(xì)胞等溶酶體內(nèi)，以肝腎含量高，它主要水解含有巖藻糖的脂質(zhì)，粘蛋白及粘多糖. 正常組織糖苷酶的釋放率變化很小(孕婦除外)，從而使血清糖苷酶維持在一定范圍內(nèi). 血清AFU水平測(cè)定以往主要用于該酶缺陷引起的巖藻糖酶缺陷病. 近年來(lái)發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清AFU水平有別于其他肝膽疾病，呈顯著性升高，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中觀察到morris鼠肝癌組織中AFU活力較正常肝臟高7倍，可作為一 項(xiàng)肝癌非特異性標(biāo)志物用于本病的診斷，其陽(yáng)性率為73.9%～81%，特異性為90%. 在AFU陽(yáng)性與陰性肝癌患者中，AFU陽(yáng)性率之間無(wú)明顯差異。

檢測(cè)原理：2-氯-4-硝基苯基-α-L-巖藻糖苷（2-Chloro-4-nitrophenyl-Alpha-L- Fucopyranoside, CNP-AFU）被樣本中的α-L-巖藻糖苷酶作用水解產(chǎn)生2-氯-4-硝基苯（CNP）, 或者M(jìn)G-2-氯-對(duì)硝基苯酚-α-L-巖藻糖苷(M-G-CNP-AFU)被樣本中的α-L-巖藻糖苷酶的作用，水解產(chǎn)生MG和 CNP。測(cè)定CNP的吸光度的增加量即可以得到AFU的活性。

CNP-α-L-Fucoside＋H2O →CNP＋α-L-巖藻糖

或MG-CNP-α-L-Fucoside＋H2O →M＋G＋CNP＋α-L-巖藻糖

4、GPDA檢測(cè)

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Glycyl Proline Dipeptidyl Aminopeptidase.GPDA）廣泛分布于人的腎臟、結(jié)締組織、唾液腺、淋巴結(jié)等組織和人的血清、唾液中。主要功能為分解來(lái)自膠原的多肽，對(duì)維 護(hù)結(jié)締組織和上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能具有重要價(jià)值。

自從七十年代，血清GPDA測(cè)定被應(yīng)用于臨床以來(lái)，GPDA的臨床價(jià)值得到了深入的研究和廣泛的臨床應(yīng)用。臨床上主要應(yīng)用在胃癌的輔助診斷、胃癌是否產(chǎn)生 肝轉(zhuǎn)移的鑒別;同時(shí)在原發(fā)性肝癌、繼發(fā)性肝癌中臨床價(jià)值得到了廣泛的應(yīng)用[1-3]。隨著GPDA的廣泛使用，在其他疾病，例在乳腺癌、腎早期損害、類風(fēng) 濕病等等疾病中的研究得到長(zhǎng)足的發(fā)展。

檢測(cè)原理：在堿性條件下，GPDA催化底物甘氨酰-脯氨酰-對(duì)硝基苯胺對(duì)甲苯磺酸鹽（Gly-Pro p-nitroanilide p-toluenesulfonate salt, H-Gly-Pro-Pna）水解，生成甘氨酰脯氨酸和黃色的對(duì)硝基苯胺，后者可引起在特定波長(zhǎng)下吸光度的升高，吸光度升高速率與GPDA活性成正比。

5、亮氨酸氨基肽酶測(cè)定

亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase, LAP)是一種蛋白分解酶, 能水解肽鏈N端并由亮氨酸與其他氨基酸形成肽鍵的酶, 廣泛分布于肝、胰、腎等組織中。當(dāng)人體肝、膽、胰等組織有病變時(shí), 均可出現(xiàn)血清LAP水平升高。測(cè)定血清亮氨酸氨基轉(zhuǎn)肽酶可作為肝病診斷的又一項(xiàng)指標(biāo), 對(duì)淤膽性肝炎的鑒別診斷、肝道梗阻及胰腺癌的診斷有價(jià)值。其肝癌的檢出陽(yáng)性率較ADA高，比GGT 反映肝臟疾病更加靈敏。亮氨酸氨基肽酶（LAP）的檢測(cè)也可早期反映腎損害的性質(zhì)和程度，并為臨床鑒別腎小球、腎小管損傷提供可能的幫助；其亦可作為妊娠 合并ICP及孕婦和胎兒健康情況動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的一項(xiàng)有效指標(biāo)。

檢測(cè)原理：采用L-亮氨酸對(duì)硝基苯胺鹽酸鹽(L-Leucine-p-nitroanilide, H-Leu-Pna-HCl, CAS16010-98-3)作為底物, 經(jīng)LAP水解，通過(guò)檢測(cè)對(duì)硝基苯胺(P-nitroaniline)來(lái)測(cè)定LAP的活性。 具有以下優(yōu)點(diǎn):速率法、測(cè)試速度快、操作簡(jiǎn)便、適用于全自動(dòng)生化分析儀。

6、脯氨酸肽酶(PLD)檢測(cè)

血清脯氨酸肽酶(Prolidase，PLD)或脯肽酶，是一種廣泛存在于人體各組織和細(xì)胞的亞氨基肽酶，它催化含有C-末端或2肽的水解，對(duì)膠原合成和 細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的再循環(huán)起重要作用。其血中水平變化與肝損害程度及肝病慢性化密切相關(guān)。脯氨酸肽酶全稱為亞氨基2肽酶，是由兩個(gè)相同的亞單位組成的二聚 體，其分子量為97kD。每個(gè)亞單位由492氨基酸組成，富含。人PLD基因位于19號(hào)染色體短臂上。整個(gè)基因長(zhǎng)達(dá)140Kb以上，包括14個(gè)內(nèi)含子和 15個(gè)外顯子。內(nèi)含子長(zhǎng)度從1.0～50Kb，占全部基因的98.60%；外顯子長(zhǎng)度從45～5286p，共約1.9Kb，僅占全部基因的1.4%。人 PLD表達(dá)從5＇末端開(kāi)始，開(kāi)放讀碼框架1.47bp，編碼493氨基酸。起始為蛋氨酰基，它隨后脫落，位于第2位的基因此封閉成為N-末端的最終氨基 酸，故其原單位僅剩492個(gè)氨基酸。

檢測(cè)原理：PLD活性的測(cè)定方法較多．其中比較有實(shí)用價(jià)值的測(cè)定方法是分光光度比色法，其基本原理是以甘氨酰一L一脯氨酸為底物在脯氨酸肽酶的作用下釋放出脯氨酸： 然后通過(guò)脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成紫紅色化合物來(lái)測(cè)定所釋放出的脯氨酸量，以產(chǎn)物脯氨酸的量來(lái)反映PLD的活性。

7、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性的測(cè)定

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin-converting enzyme, ACE)是一種結(jié)合糖蛋白，含有鋅元素，屬二肽羧肽酶。可使血管緊張素I形成具有升血作用的血管緊張素II，后者使血管進(jìn)一步收縮、血壓升高。血管緊張素 轉(zhuǎn)化酶也可使具有降壓作用的舒緩激肽滅活，還可能直接作用于腎上腺皮質(zhì)促進(jìn)醛固酮的分泌。是腎素-醛固酮系統(tǒng)及緩激肽系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因素。血清血管緊張素 I轉(zhuǎn)化酶活性的測(cè)定常用于結(jié)節(jié)病的診斷和活動(dòng)性診斷。

檢測(cè)原理：底物N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸(N-[3-(2-Furyl)acryloyl]-L- phenylalanyl-glycyl -glycine, FAPGG)最大吸收峰在340nm。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶酶解FAPGG生產(chǎn)FAP及GG，從而發(fā)生在340 nm處吸光度的下降變化，可進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)法。通過(guò)測(cè)定FAPGG在340nm處吸光度下降的速度可計(jì)算出血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的活性。

FAPGG     ACE       FAP + GG 

8、胱抑素C水平測(cè)定

胱抑素C，也稱半胱氨酸蛋白酶抑制劑C( Cystatin C)是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中, 是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，分子量為13.3KD，由122個(gè)氨基酸殘基組成, 可由機(jī)體所有有核細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定。循環(huán)中的胱抑素C僅經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)而被清除，是一種反映腎小球?yàn)V過(guò)率變化的內(nèi)源性標(biāo)志物,

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