眾所周知，三陰性乳腺癌（Triple-negative breast cancer，TNBC）是具有高轉(zhuǎn)移性的惡性腫瘤，并且沒(méi)有可用的分子靶點(diǎn)。2018年11月，來(lái)自西班牙圣地亞哥大學(xué)醫(yī)學(xué)院等多個(gè)研究機(jī)構(gòu)的學(xué)者在《International Journal of Cancer》上發(fā)表研究成果，首次使用來(lái)自于轉(zhuǎn)移性TNBC患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC），建立了異種移植模型（CTCs derived xenografts，CDX）。通過(guò)對(duì)模型的深入研究，發(fā)現(xiàn)WNT信號(hào)傳導(dǎo)是該腫瘤生物學(xué)相關(guān)的主要機(jī)制；并且，MELK的過(guò)表達(dá)與和較差的患者存活率相關(guān)?？傮w而言，該研究表明來(lái)自TNBC患者的CTC具有致瘤性，并且提示CDX可以作為提供腫瘤進(jìn)展信息的有用模型。

三陰性乳腺癌（TNBC）約占乳腺癌病例中的10%到20%。因?yàn)榇萍に厥荏w（ER）、孕激素受體（PR）和原癌基因Her-2均為陰性，所以還沒(méi)有特有的針對(duì)三陰性乳腺癌的治療指南。根據(jù)不同分期的患者，目前的治療手段一般是結(jié)合手術(shù)和放化療。所以，尋找其他的治療靶點(diǎn)和藥物一直是研究人員努力的方向。

患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cells，CTC）是從實(shí)體瘤中脫離并且存在于患者血液循環(huán)系統(tǒng)中的癌細(xì)胞。這些細(xì)胞可指示遠(yuǎn)端是否存在腫瘤。對(duì)于CTC的研究是對(duì)癌癥的轉(zhuǎn)移機(jī)制的探索至關(guān)重要的一步。然而針對(duì)于CTC的分子分析和擴(kuò)增保存一直存在技術(shù)的局限性。到目前為止，文獻(xiàn)中只有2例使用乳腺癌患者的CTC建成異種移植模型的成功案例。此次研究是首次針對(duì)于三陰性乳腺癌患者的CTC而建立的異種移植模型。

此次研究共有32位三陰性乳腺癌的患者參與，并且有22位年齡適配的健康志愿者參與作為對(duì)照（此實(shí)驗(yàn)通過(guò)了倫理委員會(huì)的審查，每位參與者都簽署了知情同意書）。研究人員分一次或多次收集了每位參與者的外周血用于CTC的搜集。其中，一位43歲的患者（編號(hào)#20）在腫瘤轉(zhuǎn)移初期每7.5ml血中檢測(cè)出5個(gè)CTC單細(xì)胞；經(jīng)過(guò)一年的放化療，病情發(fā)生進(jìn)展，再次檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)每7.5ml血液中有高達(dá)969個(gè)CTC單細(xì)胞和74個(gè)細(xì)胞團(tuán)。除此之外，此患者的FFPE組織標(biāo)本（包括手術(shù)和化療前和轉(zhuǎn)移后）也同時(shí)被收集。

研究人員利用此患者（#20）病情進(jìn)展后收集到的CTC在免疫缺陷小鼠皮下移植，5個(gè)月后成瘤（CDX1），在傳代時(shí)分別進(jìn)行了皮下建模（CDX2）和原位建模（CDX2M）。在原位模型CDX2M中，研究人員在小鼠的血液中發(fā)現(xiàn)了CTC，揭示了這些細(xì)胞的潛在轉(zhuǎn)移性。

圖1，CDX傳代過(guò)程

研究人員對(duì)患者的臨床樣本和CDX模型的樣本進(jìn)行了病理判斷和免疫組化分析，其結(jié)果基本顯示一致。另外，RNAseq測(cè)序結(jié)果顯示，在患者的轉(zhuǎn)移灶樣本和CDX樣本中，有433個(gè)高表達(dá)的基因重合，這些基因大部分和細(xì)胞周期（cell cycle）有關(guān)。研究人員做了進(jìn)一步的基因本體分析（gene ontology analysis，GO），在所有樣本中都發(fā)現(xiàn)WNT信號(hào)通路的高度激活。之前有研究表示過(guò)，WNT信號(hào)通路的高度激活和乳腺癌患者的腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后效果差可能有著很大的關(guān)系。此次數(shù)據(jù)再次證明了此觀點(diǎn)，并為將來(lái)尋找新的治療靶點(diǎn)提供了參考信息。

圖2：CDX1模型腫瘤組織免疫組化

MELK（Maternal Embryonic Leucine zipper Kinase）一直被認(rèn)為是影響腫瘤生長(zhǎng)進(jìn)展及分化的重要激酶。研究人員通過(guò)對(duì)32位患者CTC的測(cè)序結(jié)果和對(duì)患者的隨訪的分析比較，統(tǒng)計(jì)出MELK的表達(dá)和患者的生存期有關(guān)：MELK高表達(dá)的患者的總生存期（OS）和無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）低于MELK低表達(dá)的患者，分別相差27.25 和 17.7個(gè)月之多。因此，這些數(shù)據(jù)標(biāo)志著MELK也許可以作為液體活檢中潛在的標(biāo)志物，并且也為正在進(jìn)行的MELK抑制劑研發(fā)工作提供有價(jià)值的信息。

圖3：患者生存期和MELK的表達(dá)關(guān)系

總體而言，該研究通過(guò)對(duì)來(lái)自TNBC患者的CTCs以及CDX（CTCs Derived Xenograft）分子分型的分析，為三陰性乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了重要的數(shù)據(jù)，并且提示CDX可以作為提供腫瘤進(jìn)展信息的有用模型。上海立迪具有成熟的CTC檢測(cè)平臺(tái)，可為潛在的轉(zhuǎn)移性腫瘤提供線索，為早期針對(duì)性治療提供可能。另外，上海立迪對(duì)于利用患者CTC建立CDX模型具有豐富的經(jīng)驗(yàn)，囊括胃癌，肺癌和卵巢癌等多種癌種。上海立迪保持開(kāi)放的態(tài)度，期待和更多的醫(yī)生學(xué)者合作進(jìn)行科研探討，為患者帶來(lái)希望。