Q1.　如何溶解內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品？

Q2.　依據(jù)日本藥典進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)使用哪種內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品？

Q3.　如何區(qū)分凝膠法、比濁法、比色法？

Q4.　檢測(cè)時(shí)必須使用檢測(cè)專用耗材嗎？

Q5.　如何確定胃腸道外給藥的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)值？

Q6.　如何計(jì)算MVD（有效稀釋率峰值）？

Q7.　如何對(duì)不溶于水的樣品進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)？

Q8.　樣品保存方法？

Q9.　如何調(diào)整樣品的pH值？

Q10.　檢測(cè)用試管可重復(fù)使用嗎？

◆檢測(cè)儀器相關(guān)問題

Q11.　各款內(nèi)毒素檢測(cè)儀器有什么區(qū)別？

Q12.　終點(diǎn)法與動(dòng)力學(xué)法有何區(qū)別？

Q13.　Toxinometer的檢測(cè)原理是什么？

Q14.　使用Toxinometer時(shí)可隨意更改閾值、等待時(shí)間和計(jì)數(shù)嗎？

Q15.　Toxinometer ET-6000的檢測(cè)波長(zhǎng)是多少？

Q16.　使用簡(jiǎn)易型內(nèi)毒素檢測(cè)系統(tǒng)Endosafe-PTS Leader需要注意的地方是？

◆檢測(cè)試劑相關(guān)問題

Q17.　什么是內(nèi)毒素特異性試劑？

Q18.　單次檢測(cè)和多次檢測(cè)有什么區(qū)別？

Q19.　雖然單次檢測(cè)和多次檢測(cè)的樣本量不同，但有必要考慮濃度的差異嗎？

Q20.　鱟試劑的保存溫度是？

◆內(nèi)毒素檢測(cè)相關(guān)問題

日本藥典內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（JP-RSE）：加入內(nèi)毒素檢測(cè)用水使內(nèi)毒素限值達(dá)到10,000EU/mL，再劇烈攪拌5分鐘。

美國(guó)藥典內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（USP-RSE）：加入5mL內(nèi)毒素檢測(cè)用水（2000EU/mL），再劇烈攪拌30分鐘。

內(nèi)毒素控制標(biāo)準(zhǔn)（CSE）：加入內(nèi)毒素檢測(cè)用水使內(nèi)毒素限值達(dá)到1000EU/mL，再劇烈攪拌2分鐘。

 

Q2.　依據(jù)日本藥典進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)使用哪種內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品？

必須使用藥典規(guī)定的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品。（JP-RSE、USP-ESE、EP-RSE）

 

Q3.　如何區(qū)分凝膠法、比濁法、比色法？

進(jìn)行半定量分析時(shí)采用凝膠法，進(jìn)行定量分析時(shí)采用比色法和比濁法。

比色法和比濁法基本上沒有太大的區(qū)別。但它們?cè)跈z測(cè)儀器、試劑的檢測(cè)范圍以及檢測(cè)成本上存在差異。選擇前需慎重考慮。

如果對(duì)凝膠法、比色法和比濁法的檢測(cè)結(jié)果存在疑問或爭(zhēng)議，請(qǐng)以凝膠法的結(jié)果為終判定。

 

Q4.　檢測(cè)時(shí)必須使用檢測(cè)專用耗材嗎？

不必使用檢測(cè)專用耗材。但必須使用不含內(nèi)毒素或β-葡聚糖的器具。玻璃器具可以通過30分鐘以上，超過250℃的干熱滅菌來滅活內(nèi)毒素。洗脫出的微量金屬離子（Fe、Al、Ga、Cr等）會(huì)影響內(nèi)毒素檢測(cè)，因此要避免使用金屬器具。除了獲得生產(chǎn)商的保證外，還要確認(rèn)一次性塑料器①不受內(nèi)毒素污染；②不吸附內(nèi)毒素；③洗脫物不含影響檢測(cè)結(jié)果。

 

Q5.　如何確定胃腸道外給藥的內(nèi)毒素限值？

藥典各項(xiàng)中沒有規(guī)定內(nèi)毒素限值的樣品設(shè)定如下。

內(nèi)毒素限值(EU/mL)= K值(EU/kg)/人給藥量峰值(mL/kg)＊1

 

-參考-

日本、美國(guó)、歐洲藥典規(guī)定的K值（致熱內(nèi)毒素量）

 

Q6.　如何計(jì)算MVD（有效稀釋率峰值）？

計(jì)算公式如下。

λ：※凝膠法中表示標(biāo)記凝膠靈敏度，光學(xué)法中表示標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度谷值

FUJIFILM Wako的Toxinometer/MPR內(nèi)毒素檢測(cè)系統(tǒng)配套軟件"ToximasterQC"帶有MVD自動(dòng)計(jì)算功能。

 

Q7.　如何對(duì)不溶于水的樣品進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)？

不溶于水的樣品如果能溶于1％乙醇或1％DMSO，進(jìn)行檢測(cè)時(shí)不會(huì)對(duì)鱟試劑造成影響。

不溶于上述溶劑的樣品可使用鱟試劑PS Single（產(chǎn)品編號(hào)：299-54501），檢測(cè)時(shí)不受共存物質(zhì)的影響。

（應(yīng)用實(shí)例）可溶于乙醇、硅油、大豆油、橄欖油、硬脂酸、蛋黃卵磷脂、油佐劑疫苗、白蛋白制劑、凝血因子制劑（第8因子）、干擾素制劑、抗凝血酶III制劑、免疫球蛋白制劑等溶劑的樣品都能進(jìn)行檢測(cè)。

 

Q8.　樣品保存方法？

保存時(shí)請(qǐng)注意以下幾點(diǎn)。

● 樣品中不能有活菌繁殖

● 內(nèi)毒素值不會(huì)根據(jù)保存期而發(fā)生變化

● 確保保存容器無內(nèi)毒素污染，無內(nèi)毒素吸附，不含影響檢測(cè)結(jié)果的洗脫物。

 

Q9.　如何調(diào)節(jié)樣品的pH值？

如果樣品溶液的pH值不在6.0～8.0范圍內(nèi)，就需要作出調(diào)節(jié)。

（內(nèi)毒素檢測(cè)的較佳pH值約為7.3，但由于鱟試劑中含有緩沖組分，因此允許在pH6.0～8.0內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)）

能進(jìn)行稀釋的樣品可通過稀釋調(diào)節(jié)pH值。不能稀釋的樣品，可在樣品溶液中加入稀NaOH或HCl溶液來調(diào)節(jié)pH值。

還可以利用緩沖液來稀釋樣品溶液。建議使用按需配制的NaOH、HCl調(diào)節(jié)pH值。

 

Q10.　檢測(cè)用試管可重復(fù)使用嗎？

檢測(cè)用試管不可重復(fù)使用。

稀釋或樣品保存用試管可在進(jìn)行250℃超過30分鐘的干熱滅菌后重復(fù)使用。

 

◆檢測(cè)儀器相關(guān)問題

Q11.　各款內(nèi)毒素檢測(cè)儀有什么區(qū)別？

檢測(cè)儀器的選擇請(qǐng)參照下表。

 

 

Q12.　終點(diǎn)法與動(dòng)力學(xué)法有何區(qū)別？

● 終點(diǎn)法：反應(yīng)一段時(shí)間后，利用反應(yīng)后的濁度或吸光度的大小與內(nèi)毒素濃度的反應(yīng)關(guān)系的方法

● 動(dòng)力學(xué)法：利用達(dá)到一定濁度或吸光度的時(shí)間和內(nèi)毒素濃度的反應(yīng)關(guān)系的方法，又或者利用濁度或吸光度的實(shí)時(shí)變化率與內(nèi)毒素濃度之間的反應(yīng)關(guān)系的方法

 

Q13.　Toxinometer的檢測(cè)原理是什么？

內(nèi)毒素檢測(cè)儀-Toxinometer® ET-6000

 

Q14.　使用Toxinometer時(shí)可更改閾值、等待時(shí)間和計(jì)數(shù)嗎？

可以。但在這種情況下不能保證試劑的性能。

 

Q15.　Toxinometer ET-6000的檢測(cè)波長(zhǎng)是多少？

中心波長(zhǎng)為430nm。

 

Q16.　使用簡(jiǎn)易型內(nèi)毒素檢測(cè)系統(tǒng)Endosafe-PTS Reader需要注意的地方是？

請(qǐng)將使用過的Cartridge恢復(fù)至室溫后再使用。

Endosafe-PTS主機(jī)建議每年進(jìn)行一次溫度校正。

 

Q17.　什么是內(nèi)毒素特異性試劑？

一般來說，鱟試劑除了與內(nèi)毒素，還會(huì)與真菌細(xì)胞壁組成成分的（1→3）-β-D-葡聚糖發(fā)生反應(yīng)。只與內(nèi)毒素產(chǎn)生反應(yīng)的試劑就是內(nèi)毒素特異性試劑。

 

Q18.　單次檢測(cè)和多次檢測(cè)有什么區(qū)別？

● 單次檢測(cè)：預(yù)先將單次分量的鱟試劑添加到反應(yīng)試管中

● 多次檢測(cè)：用內(nèi)毒素檢測(cè)用水溶解鱟試劑，再將一定量的鱟試劑添加到反應(yīng)試管或孔板中使用

 

Q19.　單次檢測(cè)和多次檢測(cè)的樣本量不同，但需要考慮濃度的差異嗎？

試劑是根據(jù)添加的樣品量來制備的，因此上述問題不存在。

但由于上樣量不同，當(dāng)樣品中含有反應(yīng)干擾因子時(shí)，它對(duì)檢測(cè)的抑制和促進(jìn)會(huì)受到不同方式的影響。

 

Q20.　鱟試劑的保存溫度是？

所有鱟試劑都應(yīng)冷藏保存。

溶解后的鱟試劑要在每種試劑要求的條件下保存。（例如：ES-Ⅱ系列請(qǐng)?jiān)诶鋬霎?dāng)日使用。）

非當(dāng)日使用的話要在每種鱟試劑要求的保存溫度※下冷凍保存，并在2周內(nèi)使用。請(qǐng)勿重復(fù)凍融一次以上。

※ES-Ⅱ系列：－10℃～－30℃

　ES-F系列、ES-F/Plate：－10℃～－20℃

　Color KY系列：－80℃以下

　J/F系列：-20℃～-30℃