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PROTEOSTAT^® 蛋白質重折疊和聚集靈敏試劑盒

確定蛋白質重折疊優化條件和功能蛋白峰值回收率

●　不僅僅是針對重折疊 - 通過完整的工作流程，使用PROTEOSTAT®染料確定非通路蛋白質聚集的條件

●　一整套優化的篩選試劑和有助于蛋白質重折疊的條件。

●　使用實驗設計值（DOE）進行快速微孔板篩選，以確定對蛋白質形成至關重要的參數。

PROTEOSTAT^® 蛋白質重折疊和聚集靈敏試劑盒，提供了統一采用分數因子矩陣的分析方法，便于在不同緩沖液體系的蛋白質重折疊的參數。它也是一種使用專有紅色發射光聚集敏感的分子轉子染料監測蛋白質聚集的簡單統一的分析方法。對于低熒光讀數的特定樣品（因此聚集成分少），可采用傳統的根據酶活測定重折疊成功率的方法進行驗證。

圖1：在氧化還原環境下重新折疊溶菌酶。根據DOE矩陣（產品說明書，表1）進行實驗設計。具體而言，20 mg/mL溶菌酶首先在4°C的6M胍溶液中變性18小時。然后，將變性溶菌酶以1:20稀釋到不同的折疊緩沖液中，并在4°C下培養過夜。進行PROTEOSTAT®蛋白質重折疊和聚集靈敏分析時，將1:20稀釋的重折疊溶液直接添加到含染料的PROTEOSTAT®分析緩沖液中，并測定熒光強度（Ex=550 nm，Em=610 nm）。折疊緩沖液中溶菌酶的酶活，是使用20µg/mL溶血微球菌（Micrococcus lysodeikticus）細胞壁測量，該細胞壁被熒光素過量標記，引發染料淬滅。當溶菌酶作用于該底物時，細胞壁上未被染色標記的片段被釋放。測定熒光強度增加（Ex/Em 490/520nm）。經PROTEOSTAT®分析緩沖液中稀釋的天然蛋白質可作為聚集和活性測定的參照。具有高聚集信號的重折疊溶液通常具有低酶活性，因此應避免。1A-15A：含DTT；1B-15B：含GSH/GSSG。

圖2:確定重折疊緩沖液13B具有高活性和低熒光，如圖1所示，并被選來評估溶菌酶重折疊時的賦形劑的影響。賦形劑單獨添加到含GSH/GSSG的折疊緩沖液中，并分析其聚集和活性，如圖1所示。結果表明，氯化鎂在z重折疊緩沖液13B中促進重折疊結果較好，聚集趨勢較小。

◆產品詳情

應用特點	PROTEOSTAT®蛋白質重折疊和聚集靈敏試劑盒，提供了統一采用分數因子矩陣的分析方法，便于在不同緩沖液體系的蛋白質重折疊的參數。它也是一種使用專有紅色發射光聚集敏感的分子轉子染料監測蛋白質聚集的簡單統一的分析方法。
品質保證	按手冊所述的規程，將變性溶菌酶重折疊以比較不同緩沖液中的相對熒光。
數量	192次反應
使用/穩定性	如果儲存得當，試劑盒組分自收到之日起可穩定一年。
儲存條件	避光。避免反復凍融。
運輸方式	干冰運輸
儲存溫度	-20°C
組分	PROTEOSTAT® 檢測試劑, 22 µl 10X PROTEOSTAT® 分析緩沖液, 1 x 2 ml 2X 折疊緩沖液 1-15, 10 ml each 溶菌酶標準, 10 mg 變性劑: 6M 鹽酸胍 (GdnHCl), Tris鹽酸鹽l (pH 8), 14 ml 100 mM DTT, 1 ml GSH, 46.1 mg GSSG, 18.4 mg 10 mM 聚乙二醇, 1 ml 500 mM EDTA, 1 ml 400 mM 氯化鈣, 1 ml 400 mM 氯化鎂, 1 ml 1 M 氯化鈉, 1 ml 0.1% 吐溫20, 1 ml 1.2 M 蔗糖, 1 ml α-環糊精 (200 mg/ml), 1 ml
技術信息/產品說明	PROTEOSTAT®蛋白質重折疊和聚集靈敏試劑盒是PROTEOSTAT®試劑和分析試劑盒產品線一員，已在蛋白質聚集應用中進行了廣泛測試。PROTEOSTAT®試劑和試劑盒較適合使用顯微鏡、流式細胞儀、微板讀數器和HCS/HTS進行的蛋白質分析，對一致性和再現性有要求。
監管狀態	RUO - 僅供研究使用

◆參考文獻

Aggregation analysis of therapeutic proteins, part 1: T. Arakawa, et al.; Bioprocess International 4 (10), 32 (2006),
Investigation of protein refolding using a fractional factorial screen: A study of reagent effects and interactions: M. Willis, et al.; Protein Sci. 14, 1818 (2005),
Structure of the cross-beta spine of amyloid-like fibrils: R. Nelson, et al.; Nature 435, 773 (2005),
High-throughput automated refolding screening of inclusion bodies: R. Vincentelli, et al.; Protein Sci. 13, 2782 (2004),

◆產品列表

產品編號	產品名稱	包裝
ENZ-51040-KP002	PROTEOSTAT^® 蛋白質重折疊和聚集靈敏試劑盒 PROTEOSTAT^® Protein refolding and aggregation sensing kit	2x96 wells

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