【名稱】辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）
【貨號】ECE0066M
【外觀】凍干粉
【CAS】9003-99-0
【來源】Armoracia rusticana
【保存條件】-20℃保存
【有效期限】2 年

西寶生物辣根過氧化物酶的質量指標

 

每一個HRP分子中含一個氯化血紅素IX作輔基，該輔基在403nm波長處有最大吸收峰，而去輔基的酶蛋白在275nm波長處有最大吸收。RZ(Reinheits Zahl)值即為HRP在403nm的OD值（血紅素引起的吸收率）與275nm的OD值（蛋白質引起的吸收率）之比。

辣根過氧化物酶是目前使用廣泛的一種標記酶，用來標記抗體或其它蛋白質，既能用于定位檢測，也能用于定量測定。 辣根過氧化物酶（HRP）的從辣根根（Amoracia RUSTICANA）中分離。它是用于生物化學中的應用，如western印跡，ELISA和免疫組化。辣根過氧化物酶是用來放大弱信號，增加被探測的目標分子，如蛋白質。它通常被用于確定葡萄糖和溶液中的過氧化物的量。它也被用于在煙曲霉快速藥敏測定。

 

辣根過氧化物酶HRP是目前在ELISA中應用為廣泛的標記用酶，主要原因一方面是其易于提取，價格相對低廉；另一方面性質穩定，耐熱及有機溶劑的作用，與抗原或抗體偶聯后，活性很少受損失。西寶生物隆重推出用于免疫標記的辣根過氧化物酶HRP（RZ≥3.0，活性≥290U/mg），詳情致電400-021-8158。以下就辣根過氧化物酶HRP標記抗體的過程做下詳細介紹。

1) 透析膜依次浸泡于50%乙醇1h，10mmol/L NaHCO3　1h, 1 mmol/L EDTA 1h,在蒸餾水中洗兩次并放于含0.01% (m/V)疊氮鈉的0.1mol/L磷酸鈉緩沖液，于4℃保存。
2) ≥1mg/ml抗體溶液(A280=1.44mg IgG/ml)對2L 0.1mol/L pH6.8的磷酸鈉緩沖液透析，于4℃緩慢攪動下過夜。
3) 10mgHRP溶解于1ml0.1mol/LpH9.2的碳酸鹽緩沖液，取0.25ml加入0.25ml新配制的1.71 mg/ml NaIO4溶液中，蓋緊混勻，于室溫下避光放置2h。
4) 取1ml透析后的抗體溶液和0.25g SephadexG-25加至0.5mlHRP/NaIO4混合液中。用玻璃棉塞緊巴斯德吸管管尖并用Parafilm封口膜封好。將抗體/葡聚糖凝膠/HRP混合物加人巴斯德吸管，室溫下避光放置3h。
5 )柱子用0.75ml碳酸鹽緩沖液洗脫偶聯物。加38μl 5mg/mlNaBH4溶液至洗脫物中，室溫下避光孵育30min。再加112μl 5mg/ml NaBH4溶液繼續孵育60min。
6) 加0.9ml飽和硫酸銨溶液，于4℃下溫和攪拌30min。于4℃，10000g離心15min。
7) 棄上清。沉淀重溶于0.75 ml TEN緩沖液中，裝人透析袋于4℃對2 L TEN緩沖液透析過夜。更換TEN緩沖液再繼續透析4h。
8) 從透析袋中取出偶聯物，加BSA至20mg/ml。加等體積甘油，于-20℃保存。