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急性腎功能損傷早期檢測(cè)NGAL解決方案

2014年08月20日15:10評(píng)論:0

急性腎功能損傷早期檢測(cè)NGAL解決方案

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL),也稱為L(zhǎng)ipocalin-2(脂質(zhì)運(yùn)載蛋白-2),是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的一個(gè)新成員,它是腎功能損傷早期的生物標(biāo)志物。NGAL不僅僅存在于嗜中性粒細(xì)胞中,也會(huì)出現(xiàn)在特定的上皮細(xì)胞內(nèi),例如發(fā)生缺血性和毒性腎損傷過(guò)程中,腎小管上皮細(xì)胞中的NGAL將顯著增加,在開(kāi) 始的兩個(gè)小時(shí)內(nèi),尿液和血液中NGAL水平將顯著增加,因此NGAL是早期急性腎損傷的敏感標(biāo)志物。臨床研究證明NGAL確診急性腎損傷病人在時(shí)間上遠(yuǎn)遠(yuǎn)早于血清肌酐。

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白快速檢測(cè)酶免試劑盒,可用于人尿液、血漿和血清,適用于三聚氰胺(蛋白精)及其它化學(xué)物質(zhì)引發(fā)的腎功能損傷早期檢測(cè)和藥物代謝的腎損傷研究。本試劑盒在腎損傷發(fā)生超過(guò)2小時(shí)后即可檢測(cè)到敏感標(biāo)志物,以便患者可以及時(shí)得到治療。


產(chǎn)品線

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臨床意義

 



急性腎功能損傷過(guò)程中NGAL 水平偏高,預(yù)后將發(fā)展成為急性腎功能衰竭。急性腎功能衰竭(ARF)是心臟手術(shù)、腎毒性、腎移植常見(jiàn)的并發(fā)癥。NGAL水平偏高通常出以下情況:心血管手 術(shù)患者、病危人員、膿血性或出血性休克、腎移植、靜脈X射線造影劑的反應(yīng)和腎毒性治療反映。50%以上的病人都會(huì)出現(xiàn)一定程度的急性腎功能衰竭,通常發(fā)病 后期出現(xiàn)使得死亡率大大增加。

急性腎衰竭的預(yù)后一直沒(méi)有得到改善,在今后的四十年里將引起顯著關(guān)注。通用的診斷方法如測(cè)定血清肌酐或者半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(Cystatin C)都只能在腎功能退化后檢測(cè)出,那只能損傷后一天甚者幾天內(nèi)檢測(cè)。用NGAL蛋白快速檢測(cè)酶免試劑盒,醫(yī)生可在損傷幾小時(shí)內(nèi)對(duì)急性腎功能障礙做適當(dāng)?shù)奶幚怼?br />
Bioporto Diadnostics的研究表明,健康志愿者尿液中NGAL含量檢測(cè)結(jié)果分布0.7-9.6ng/ml,平均值為5.3ng/ml,。而血漿中的含量檢 測(cè)結(jié)果為37-106ng/ml,平均值為63ng/ml。當(dāng)腎損傷后,NGAL水平將迅速陡增。隨機(jī)檢測(cè)重病患者,尿液NGAL的濃度為110ng /ml 到40000ng/ml不等。而他們EDTA抗凝血漿檢測(cè)結(jié)果為25ng/ml到3491ng/ml。根據(jù)急性腎衰竭患者檢測(cè)的90%陽(yáng)性預(yù)測(cè)值判斷,尿 液中NGAL的陽(yáng)性判斷值為350ng/ml,而血漿檢測(cè)的陽(yáng)性判斷值為400ng/ml。

試劑盒特異性
在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi),使用常規(guī)的ELISA設(shè)備即可在1個(gè)小時(shí)內(nèi)得到檢測(cè)結(jié)果。所有的組分物質(zhì)需4℃保存,孵育操作室溫即可。該試劑盒提供即用型的標(biāo)準(zhǔn)品、試劑和包被好的板條,可節(jié)省操作的時(shí)間,操作簡(jiǎn)單,分析快捷,且操作可重復(fù)性好。

●一小時(shí)快速分析方式
●歐盟體外診斷(CE-IVD)標(biāo)志
●可檢測(cè)尿液,血漿和血清
●可重復(fù)性操作好,使用方便
即用的標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋液
包被好的ELISA板
室溫孵育
所有的組分可在4度保存
●僅需要常規(guī)的ELISA設(shè)備即可。

試劑盒組成
1、 包被的可拆式12*8酶標(biāo)板--96孔
2、 5×樣品稀釋濃縮液--1*60ml
3、 NGAL標(biāo)準(zhǔn)品1-6,每個(gè)瓶子上標(biāo)簽上均標(biāo)有鑒定的準(zhǔn)確濃度--6*1ml
4、 25×清洗濃縮液--1*30ml
5、 HRP標(biāo)記的NGAL抗體--1*6ml
6、 TMB緩沖液--1*12ml
7、 終止液--1*16ml
8、 聚丙烯U型板(樣品稀釋板)--96孔

操作流程
1.熟悉實(shí)驗(yàn)操作protocol,準(zhǔn)備酶標(biāo)儀450nm,650nm(非必須)或620nm(非必須),空白對(duì)照請(qǐng)加50ul樣本稀釋液。
2.用稀釋板稀釋樣本,1:100的血清和血漿稀釋,1:50的尿液稀釋,混勻
3.NGAL標(biāo)準(zhǔn)蛋白,每孔50ul,至于稀釋板中
4.HRP-NGAL:每個(gè)反應(yīng)孔加樣50ul,用多道移液器將稀釋板中的樣本和標(biāo)準(zhǔn)蛋白50ul移至反應(yīng)板中。
5.酶標(biāo)板加蓋后,室溫孵育30min,200/minute搖勻。
6.甩盡ELISA板內(nèi)溶液,用清洗液清洗三次,300ul每孔,甩干后在紙上拍干,最后一次清洗請(qǐng)浸泡1min。充分的清洗是為了最后的顯色。手動(dòng)加樣,比較溫和,有時(shí)容易引起高背景,可以用多道移液器清洗,也可以使用洗板機(jī)進(jìn)行清洗。
7.用多道移液器加TMB顯色液100ul至每個(gè)反應(yīng)孔,開(kāi)始加樣,請(qǐng)定時(shí)15min,加樣結(jié)束后蔽光室溫孵育15min。
8.加100ul終止液結(jié)束反應(yīng),輕輕搖勻20sec,避免溢出,在30min內(nèi)讀數(shù)。

9.酶標(biāo)儀450nm吸光度讀取OD值,參比波長(zhǎng)650nm或620nm,如果沒(méi)有,可以參考空白對(duì)照值。

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