連續(xù)離心、沉淀、過(guò)濾或萃取等物理、化學(xué)方法。我國(guó)采用酸沉淀法生產(chǎn)百日咳滅活疫苗，就是由菌體培養(yǎng)液加甲醛殺菌滅活后，用HCl調(diào)pH至3.8~4.4，靜置十幾小時(shí)自然沉淀出菌體和可溶性抗原，再離心、洗滌而得。

1 鹽析

鹽析一般是指溶液中加入無(wú)機(jī)鹽類而使某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過(guò)程。如：加濃(NH4)₂SO₄使蛋白質(zhì)凝聚的過(guò)程。鹽析可以通過(guò)各種物質(zhì)的溶解度的不同進(jìn)行分離，但是溶解度相同或差異不大很難進(jìn)行分離。

2 酸沉淀

酸沉淀是指溶液的pH改變，使得溶液中某些物質(zhì)的溶解度降低，從而凝聚沉淀。過(guò)酸容易使得蛋白質(zhì)變性。

3 超速離心

蔗糖、CsCl、KBr密度梯度離心。處理樣品量太少、操作復(fù)雜、難以控制。

采用此技術(shù)純化嗜血流感細(xì)菌(Haemophilus influenzae)外膜脂蛋白P6，先連續(xù)離心(9000g)收獲菌體超聲破碎，再高速離心(21000g)沉淀出肽聚糖和含有P6的未破碎細(xì)胞，然后超速離心(100000g)除去肽聚糖，加壓透析得到目的抗原組分。

 

膜過(guò)濾、分子篩層析、離子交換層析、親和層析等。

1 膜過(guò)濾

膜過(guò)濾是一種與膜孔徑大小相關(guān)的篩分過(guò)程，以膜兩側(cè)的壓力差為驅(qū)動(dòng)力，以膜為過(guò)濾介質(zhì)，在一定的壓力下，當(dāng)原液流過(guò)膜表面時(shí)，膜表面密布的許多細(xì)小的微孔只允許水及小分子物質(zhì)通過(guò)而成為透過(guò)液，而原液中體積大于膜表面微孔徑的物質(zhì)則被截留在膜的進(jìn)液側(cè)，成為濃縮液，因而實(shí)現(xiàn)對(duì)原液的分離和濃縮的目的。

2 分子篩層析（凝膠過(guò)濾層析）

使用有一定大小孔隙的凝膠作層析介質(zhì)(如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)，利用凝膠顆粒對(duì)分子量和形狀不同的物質(zhì)進(jìn)行分離的層析技術(shù)。由于各種分子的大小、形狀不同，擴(kuò)散到凝膠孔隙內(nèi)的速度不同，因而通過(guò)層析柱的快慢不同而分離。

 

3 離子交換層析

固定相是離子交換劑的層析分離技術(shù)。樣品中待分離的溶質(zhì)離子，與固定相上所結(jié)合的離子交換，不同的溶質(zhì)離子與離子交換劑上離子化的基團(tuán)的親和力和結(jié)合條件不同，洗脫液流過(guò)時(shí)，樣品中的離子按結(jié)合力的弱強(qiáng)先后洗脫。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域此法常用于分離蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子。

4 親和層析

利用分子與其配體間特殊的、可逆性的親和結(jié)合作用而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。可以選用生物化學(xué)、免疫化學(xué)或其他結(jié)構(gòu)上吻合等親和作用而設(shè)計(jì)的各種層析分離方法。如用寡脫氧胸苷酸-纖維素分離純化信使核糖核酸；用DNA-纖維素分離依賴DNA的DNA聚合酶；用瓊脂糖-抗體制劑分離抗原；用金屬螯合柱分離帶有成串組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白質(zhì)等。

 

 

 

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