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質(zhì)譜級(jí) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 Lysyl Endopeptidase

貨號(hào)：125-05061
包裝：20ug x5

英文名：Lysyl Endopeptidase， Mass Spectrometry Grade
級(jí)別：for Proteome Research
分子量：27，500
品牌：Wako
外觀：Lyophilisate. Keep at -20 degrees C.

賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶（Lysyl Endopeptidase）可以特異性剪切除賴氨酸殘基C末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測(cè)序和Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶（#125-05061）穩(wěn)定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30度孵育6小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性。

*西寶提示：我司所銷售的化學(xué)試劑、原料等所有產(chǎn)品（包括但不限于抗生素類、蛋白質(zhì)類、試劑盒類產(chǎn)品等）僅限用于科學(xué)研究用途，不得作用于人體。

訂購(gòu)熱線：400-021-8158

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質(zhì)譜級(jí) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 Lysyl Endopeptidase

賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶（Lysyl Endopeptidase）初期由Masaki等人從土壤細(xì)菌中分離得到。該酶可以特異性剪切除賴氨酸殘基C末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測(cè)序和Lys-X 化合物的酶催化合成。作為Wako官方授權(quán)分銷商，西寶生物專業(yè)提供Wako多種級(jí)別賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶，該酶穩(wěn)定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性。訂購(gòu)熱線：400-021-8158

質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶是質(zhì)譜分析前處理時(shí)常用的蛋白分解酶。若同時(shí)使用賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶和胰酶，可更好地切斷賴氨酸基團(tuán)的多肽，增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。

質(zhì)譜級(jí) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 Lysyl Endopeptidase 理化特性

表1賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶理化特性表

外觀	凍干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl buffer，pH 8）	活性	0.03~0.07AU/vial
分子量	27,000（凝膠過濾）；30,000 (SDS-PAGE)	溶解性	易溶于水或緩沖液
較佳pH	9.0-9.5（酰胺酶的較佳活性pH）	等電點(diǎn)	6.9-7.0
抑制劑	DFP、PMSF、TLCK	來源	細(xì)菌
穩(wěn)定性	溶于pH 值5.0-12.0 的Tris緩沖液中，可于4℃穩(wěn)定保存2年。溶于pH 值6.0-11.0 的緩沖液中，可于30℃穩(wěn)定保存，但是50℃及以上不穩(wěn)定。
單位定義	一單位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 時(shí)每分鐘產(chǎn)生1 μmol 對(duì)硝基苯胺所需的酶量。
底物特異性	水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
底物特異性	非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

質(zhì)譜級(jí) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 Lysyl Endopeptidase 產(chǎn)品特點(diǎn)

高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析
提高裂解效率、增加肽段數(shù)量
根據(jù)使用量特意制備小包裝，方便使用

質(zhì)譜級(jí) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 Lysyl Endopeptidase 應(yīng)用實(shí)例

分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶(Lep) 和Tp 與Lep聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)酶切的效果比較：牛血清蛋白BSA 的條帶(100ng) 通過SDS-PAGE 獲得，然后分別用Tp、Lep 和Lep+Tp 進(jìn)行酶切，再用MALDI-TOFMS 法進(jìn)行分析。蛋白酶的實(shí)驗(yàn)效果如下表：

表2 Tp、Lep 和 Lep+Tp 的蛋白酶酶切結(jié)果對(duì)照

	Tp	Lep	Lep +Tp
裂解位點(diǎn)	精氨酸和賴氨酸的C端	賴氨酸的C端	精氨酸和賴氨酸的C端
錯(cuò)誤裂解率 (錯(cuò)誤裂解所占比例)	多(8%)	很少(0%)	少(3%)
鑒定出的多肽數(shù)量	17	19	22

結(jié)果表明 Lep 酶解的錯(cuò)誤裂解率低，Tp酶解時(shí)加入Lep后，錯(cuò)誤裂解率有所降低，同時(shí)，可以鑒定出更多的多肽。

圖1 胰蛋白酶 (Tp)(圖 a) 和賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lep)+Tp (圖 b) 酶切后的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。

Lep+Tp酶切后，可以在m/z=2000時(shí)得到吸收峰，而單獨(dú)的Tp酶切在m/z=2000時(shí)沒有吸收峰。該結(jié)果表明Lep可以提高測(cè)序覆蓋度。

( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )

質(zhì)譜級(jí) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 Lysyl Endopeptidase 產(chǎn)品列表

品牌	產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品等級(jí)
Wako	121-05063	Lysyl Endopeptidase, MS Grade 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級(jí)	20μg	質(zhì)譜級(jí)
Wako	125-05061	Lysyl Endopeptidase, MS Grade 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級(jí)	20μgx5	質(zhì)譜級(jí)
Wako	125-02543	Lysyl Endopeptidase (R) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶	1vial(2AU)	for Biochemistry
Wako	129-02541	Lysyl Endopeptidase (R) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶	1vial(10AU)	for Biochemistry

質(zhì)譜級(jí) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 Lysyl Endopeptidase 參考文獻(xiàn)

Wada, Y., and Kadoya, M.: J. Mass Spectrom., 38, 117 (2003).
Shevchenko, A., Wilm, MM., Vorm, O., and Mann., M.: Anal. Chem., 68, 850 (1996).

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賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶|Lysyl Endopeptidase|125-05061

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