◆ STREPTOZOCIN 誘發(fā)糖尿病動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)

1．造膜前的喂養(yǎng)
  Ⅰ型糖尿病模型成模比較快，通常大鼠在普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后即可開(kāi)始造模
  Ⅱ型糖尿病模型：高脂飲食誘導(dǎo)加小劑量STREPTOZOCIN。造模前喂以高脂(高糖)飼料，誘發(fā)出胰島素抵抗。
2．高脂(高糖)飼料
  高脂(高糖)飼料成分：其中含10蔗糖，10豬油，5膽固醇；
  由基礎(chǔ)鼠飼料加蔗糖、煉豬油和蛋黃按比搭配制作高脂高糖飼料：其比例為豬油18 ,蔗糖20 ,蛋黃3 ,基礎(chǔ)飼料59。
3．預(yù)實(shí)驗(yàn)
  實(shí)驗(yàn)時(shí)STREPTOZOCIN的給藥量應(yīng)參照預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，盡量不要盲目按照文獻(xiàn)上或他人的給藥量來(lái)直接使用，鼠均重和空腹(低糖狀態(tài))抗藥力、禁食時(shí)長(zhǎng)、注射選時(shí)、以及之前飼養(yǎng)過(guò)程、測(cè)糖選時(shí)等都不相同，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定符合自己實(shí)驗(yàn)鼠的給藥計(jì)量，才是最科學(xué)的。

4．常用給藥劑量
  Ⅰ型糖尿病模型：大鼠劑量為70～65mg/Kg；
  Ⅱ型糖尿病模型：高糖高脂喂養(yǎng)1～2 個(gè)月的大鼠,STREPTOZOCIN 劑量在25～40mg/Kg或參考文獻(xiàn)（鼠均重不同，本劑量以200克均重為例）。

5．配置STREPTOZOCIN液
  檸檬酸緩沖液的配制：
  檸檬酸(FW:210.14)2.1g加入雙蒸水100mL中配成A液
  檸檬酸鈉(FW:294.10)2.94g加入雙蒸水100mL中配成B液
  鏈脲佐菌素配制液：用時(shí)將A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH計(jì)測(cè)定ph值,調(diào)節(jié)ph=4.2-4.5,即是所需配置STREPTOZOCIN的檸檬酸緩沖液。
  注射時(shí)用檸檬酸緩沖液以1的濃度溶解，按空腹體重注射相應(yīng)的STREPTOZOCIN，在30分鐘內(nèi)注射完畢。

★ STREPTOZOCIN容易失活，快速稱(chēng)取后仍要求干燥避光，推薦用干燥鋁箔(或錫箔)紙。

6．能否使用其他溶液配置緩沖液
  可以。但我們推薦使用檸檬酸。例如用醋酸等溶液，也可以做出，但其PH值不好控制，而STREPTOZOCIN只有在PH4.2-4.5的時(shí)候才具有最佳藥力活性。

7．禁食和血糖的聯(lián)系
  禁食12小時(shí)以上(一般過(guò)夜禁食，不禁水)。禁食的時(shí)間越長(zhǎng)，STREPTOZOCIN對(duì)胰島β細(xì)胞的破壞力越明顯，即藥效越高。所以相對(duì)禁食時(shí)間延長(zhǎng)，可以降低STREPTOZOCIN的用量。

腹腔注射和尾部注射的區(qū)別：
  尾部注射即靜脈注射，藥物利用率較高，同比腹腔注射，可以節(jié)省藥量，缺點(diǎn)是操作起來(lái)不如腹腔注射方便。

8．注射前有那些操作步驟
  過(guò)夜禁食后稱(chēng)重，按大鼠總重量比稱(chēng)取STREPTOZOCIN，放一干燥滅菌瓶?jī)?nèi)，外用錫紙包好，將檸檬酸緩沖液及裝STREPTOZOCIN的瓶子置冰浴，一起帶到動(dòng)物房，如果注射操作技術(shù)不熟練,應(yīng)兩組交替注射，建議分組溶解STREPTOZOCIN，比如10只或15只鼠/組。

9．注射時(shí)，推進(jìn)速度和血糖的關(guān)系
  推注的速度快，更容易形成高血糖，推注的速度慢，相對(duì)的危險(xiǎn)性較低，但也不容易成模，常規(guī)操作中多要求快速注射。當(dāng)然，STREPTOZOCIN的劑量是決定血糖高低的主要因素。

10．死鼠問(wèn)題的解決
  鼠的個(gè)體差別和空腹(低血糖)抵抗力的差異而致死亡率的不同，開(kāi)始死亡率高可能主要是血糖突然升高,鼠不適應(yīng),或發(fā)生了DKA(即酮癥酸中毒)。
  首先，一定要保證足夠的飲水量(飲水量不足容易導(dǎo)致死鼠)；其次，高血糖和低血糖都會(huì)造成死鼠，避免死鼠可以通過(guò)注射胰島素或暫時(shí)補(bǔ)糖，兩種途徑：1、常見(jiàn)為血糖過(guò)高。補(bǔ)胰島素法，補(bǔ)一些中效胰島素。例如給諾和靈n或NPH(中性魚(yú)精蛋白鋅胰島素),每次2--3個(gè)單位，過(guò)了3-5天，大鼠一般死亡率就低了；2、補(bǔ)糖法，禁食后的鼠，注射的時(shí)候已經(jīng)處于低血糖狀態(tài)，造模4小時(shí)后腹腔注射百分之20的葡萄糖，可避免因注射時(shí)血糖過(guò)低死鼠；再次，防止動(dòng)物自相殘殺。食物缺乏和供水不足的情況下，會(huì)互相撕殺、啃食同類(lèi),所以食物和飲水要供應(yīng)充足，最好是兩路供應(yīng)；最后，防止感染。糖尿病大鼠尿量多，墊料潮濕，需要勤換墊料，所以糖尿病大鼠較其他大鼠容易出現(xiàn)感染，特別是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血測(cè)血糖等侵入性操作前后，要注意消毒工作。如每次采血測(cè)血糖后可用四環(huán)素(或金霉素眼藥膏)局部涂抹處理傷口預(yù)防感染。
  模型不達(dá)標(biāo)者，三天后補(bǔ)注STREPTOZOCIN(以10mg-20mg/kg體重劑量腹腔注射)，也很容易成模，或讓血糖恢復(fù)正常后再常規(guī)劑量注射；但要達(dá)到理想的效果，往往是恢復(fù)到正常狀態(tài)下重新造模。

◆ STREPTOZOCIN的保存方法 

  2-8℃，干燥避光保存。(注：本品易潮解,如需反復(fù)取量過(guò)程中，應(yīng)避免接觸其受水受潮，受潮后30分鐘后失效，這和注射時(shí)要求其快速注射是一個(gè)道理，即其水溶液不穩(wěn)定）。

◆ 多次稱(chēng)取STREPTOZOCIN時(shí)的操作方法和注意事項(xiàng) 

  如確實(shí)需要多次稱(chēng)取，要嚴(yán)格按照避免受潮的原則操作和存放。操作方法：操作環(huán)境、盛裝容器、分裝工具都必須保證干燥。無(wú)需冰浴，分裝后用封口膜密封瓶口，用鋁箔紙(或錫箔，即避光)將瓶子包好，放入干燥罐里（干燥劑，即保持干燥狀態(tài)），并2-8℃冷藏，可長(zhǎng)期保存。

*以上材料僅供參考，不承擔(dān)任何數(shù)據(jù)責(zé)任，也真心希望能給您帶來(lái)幫助，為糖尿病科學(xué)做些貢獻(xiàn)。

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