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可溶性抗原的制備及鑒定解決方案

2014年08月20日09:45評論:0

可溶性抗原的制備及鑒定解決方案

蛋白質、糖蛋白、脂蛋白、酶類、補體、脂多糖、細菌外毒素和核酸等均為可溶性抗原,它們有相當部分來源于組織和細胞,成分復雜。制備這類免疫原時,首先須將組織和細胞破碎,然后再從組織和細胞勻漿中提取目的蛋白或其他抗原,提純的抗原需鑒定后才能用做免疫原。

一、組織勻漿的制備

用于制備免疫原的材料必須是新鮮或低溫保存的。材料獲得后立即去除包膜或結締組織,臟器應進行灌洗,去除血管內殘留的血液,用含0.5g/L NaN3的生理鹽水洗去血跡及污物;在4水浴或冰浴中將洗凈的組織剪成0.30.5cm3小塊,加入適量生理鹽水,裝入搗碎機筒內制成組織勻漿。組織勻漿經3000r/min離心10min后,上清液作為提取可溶性抗原的材料。上清液在提取前還必須進行離心去除細胞碎片及微小的組織。

二、細胞破碎

提取細胞的可溶性抗原,需將細胞破碎。根據細胞類型不同,選擇破碎的方法也有一定的差異,現介紹幾種常用的細胞破碎方法。

1、酶處理法

溶菌酶纖維素酶蝸牛酶等在一定的條件能消化細菌和組織細胞。如溶菌酶對革蘭陽性菌的細胞壁有溶菌作用。酶處理法適用于多種微生物細胞的溶解,該方法具有作用條件溫和、內含物成分不易受到破壞、細胞壁損壞程度可以控制等特點。

2、凍融法

細胞主要因突然冷凍,細胞內冰晶的形成及胞內外溶劑濃度突然改變而破壞。其方法是將破碎的細胞置-15-20冰箱內完全凍結,然后從冰箱取出,讓其在3037中緩慢融化。如此反復兩次,大部分組織細胞及細胞內的顆粒可被破。此法適用于組織細胞,對微生物的細胞作用較差。

3、超聲破碎法

這是利用超聲波的機械振動而使細胞破碎的一種方法。由于超聲波發生時的空腔作用(cavitation),使液體局部減壓,引發液體內部流動,在漩渦生成與消失時,產生很大的壓力而使細胞破碎。超聲波所使用的頻率從120kHz不等。進行超聲破碎時,需間歇進行,避免長時間超聲產熱,導致抗原破壞。也可將超聲粉碎的細胞置于冰浴降溫。超聲破碎細胞,方法簡單,重復性較好,且節省時間。微生物和組織細胞的破碎,均可采用此方法。

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